一、细胞基本属性
细胞名称:小鼠睾丸间质细胞(Mouse Leydig Cells)
细胞别称:睾丸间质细胞、Leydig细胞
种属来源:小鼠(Mus musculus)
年龄性别:健康成年雄性小鼠(供体无生殖系统疾病史)
组织来源:睾丸间质组织
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:多角形或星形,单层贴壁后呈现典型类上皮样结构
细胞代数:P3 - P8(维持睾酮分泌功能稳定)
细胞规格:1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:DMEM/F12+10%胎牛血清+1%双抗+睾酮前体物质(如孕烯醇酮)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),-150℃以下长期保存
倍增时间:约48 - 72小时(受激素刺激影响显著)
供应限制:仅限科学研究使用,不可用于临床或动物繁育
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预热培养基
- 培养瓶:75%酒精表面消毒后静置培养箱平衡1小时
传代标准:细胞融合度达80%-90%(贴壁紧密时需及时传代)
传代比例:1:2至1:3(建议接种密度4×10³ cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含0.1%胶原酶)
- 37℃消化2 - 3分钟,轻拍培养瓶促进细胞脱落
注意事项:
- 消化终止需立即加入含血清培养基
- 首次传代后48小时内避免换液以保持激素分泌稳态
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及海藻糖保护剂)
细胞密度:1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL(高密度维持细胞活性)
冻存步骤:
- 离心收集细胞后轻柔重悬于预冷冻存液
- 程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期保存
复苏验证:
- 复苏后12小时存活率≥90%(台盼蓝染色法)
- 功能验证:ELISA检测睾酮分泌量(P5代细胞应保持基础分泌水平)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输温度异常导致细胞失活(需提供冷链记录)
2. 72小时内证实微生物污染(需提交污染检测报告)
3. 复苏存活率低于85%(需提供染色结果及显微照片)
4. 细胞特异性标志物(如3β - HSD)鉴定不达标
不予重发情形:
1. 未按推荐条件进行激素诱导培养
2. 使用非包被培养器皿导致贴壁失败
3. 细胞传代超过P10代后功能异常
4. 未执行规范冻存操作引发冰晶损伤
(注:所有操作需符合生物安全规范,细胞特性可能因个体差异存在正常生物学波动)