人抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)ELISA试剂盒

产品名称

人抗促甲状腺素受体抗体(TRAb)ELISA试剂盒

规格

48T/96T

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，抗原浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。

用途

该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中浓度。

反应类型

夹心法

反应时间

4.5h

反应性

通用

检测方法

Colormetric

灵敏度

检测下线除以10

样本体积

100μL

样本类型

血清、血浆或其他相关生物液体

特异性

可检测样本中的指标,且与其它相关蛋白无明显交叉反应

重复性

板内，板间变异系数均<10%

样品活化方法

血清、血浆

280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。注意：样品被稀释了10倍！

细胞培养上清

20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。注意：样品被稀释了2倍！

组织匀浆

1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀后检测。注意：样品被稀释了50倍！

二、精密度

批内变异系数

批间变异系数

样本

1

2

3

1

2

3

数量

20

20

20

20

20

20

平均值(单位ng/mL)

0.41

1.07

4.96

0.47

1.25

4.24

标准差

0.02

0.05

0.22

0.03

0.06

0.2

变异系数 (%)

4.88

4.67

4.43

6.38

4.8

4.72

注：板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

回收率

样本类型

回收率范围 (%)

平均回收率 (%)

血清(n=5)

94-110

102

血浆(EDTA)(n=5)

90-102

96

细胞上清(n=5)

95-106

98

注：分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。

血清(n=5)

血浆(EDTA)(n=5)

细胞上清(n=5)

线性

1:2

回收率范围(%)

99-108

95-105

92-104

平均回收率(%)

105

102

97

1:4

回收率范围(%)

95-109

90-100

97-105

平均回收率(%)

102

96

100

1:8

回收率范围(%)

89-103

89-104

96-108

平均回收率(%)

97

97

102

1:16

回收率范围(%)

88-102

98-108

92-105

平均回收率(%)

94

104

100

注：分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。

试剂盒组成及保存

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

说明书

1份

1份

封板膜

2片

2片

密封袋

1个

1个

酶标包被板

1×48

1×96

标准品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

酶标试剂

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

终止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

20×浓缩洗涤液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

说明书

1份

1份

封板膜

2片

2片

密封袋

1个

1个

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
       2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
       3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

注意事项

有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。

操作步骤

1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
       2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
       3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
       4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
       5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
       6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
       7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 
       8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
       9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

试验所需自备物品

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
       2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
       3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
       4. 吸水纸

结果判断与分析