人铁调素（Hepcidin）ELISA

人铁调素（Hepcidin）ELISA 说明书（高）.pdf

一、产品概述

人血管生成抑制因子ELISA试剂盒（夹心法）是一款专为体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物样本中血管生成抑制因子水平而设计的高灵敏度检测工具。

本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法（ELISA）原理，结合精密的实验步骤和优质的试剂，为用户提供准确、可靠的检测结果。

二、产品规格

规格：48T/96T

三、检测原理与特性

检测原理：

本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法（ELISA），酶标板预包被有特异性抗血管生成抑制因子捕获抗体，与样本中的血管生成抑制因子结合后，经过洗涤去除未

结合成分，加入特异性抗血管生成抑制因子检测抗体形成夹心复合物，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，通过显色反应在450nm波长下测定吸光度（OD值）

，从而计算样本中血管生成抑制因子的浓度。

反应类型：夹心法

反应时间：约3.5-4.5小时（根据具体操作可能有所调整）

反应性：高度特异，针对人血管生成抑制因子

检测方法：比色法

灵敏度：能够检测到低于试剂盒提供的最低浓度标准品的血管生成抑制因子水平。

样本体积：50-100μL（根据具体实验设计调整）

本类型：血清、血浆或其他相关生物样本

特异性：与其他相关蛋白无明显交叉反应，确保结果的准确性。

重复性：板内及板间变异系数均小于10%，保证实验结果的稳定性和可靠性。

四、样品处理与活化方法

血清/血浆：直接取用或按一定比例稀释后使用，无需额外活化步骤。

其他样本：对于其他特定类型的样本，若需处理，请参照相关文献或咨询技术支持，以确保样本中的血管生成抑制因子处于可检测范围。

五、精密度与回收率

精密度：通过低、中、高浓度样本的批内及批间变异系数评估，均小于10%，确保结果的稳定性和可靠性。

回收率：在血清、血浆等样本中添加已知浓度的血管生成抑制因子标准品，回收率范围及平均回收率需参照实际测试结果，且在不同稀释度下表现出良好的

线性回收特性。

六、试剂盒组成及保存

48孔配置：

说明书1份

封板膜2片

密封袋1个

酶标包被板1×48（预包被抗血管生成抑制因子捕获抗体）

血管生成抑制因子标准品0.5ml×6管

酶标抗血管生成抑制因子检测抗体3ml×1瓶

辣根过氧化物酶标记的二抗3ml×1瓶

样品稀释液5ml×1瓶

显色剂A液3ml×1瓶

显色剂B液3ml×1瓶

终止液2ml×1瓶

20×浓缩洗涤液20ml×1瓶

96孔配置：同上，但各组分数量加倍。

保存条件：按说明书指示保存于2-8℃，避免反复冻融和直接光照。

七、试剂盒性能

灵敏度：能够检测到低于最低浓度标准品的血管生成抑制因子水平。

特异性：与其他相关蛋白无交叉反应，确保结果的准确性。

重复性：变异系数低，保证实验结果的稳定性和可靠性。

八、注意事项

使用前请确保所有试剂恢复至室温并充分混匀。

严格按照操作步骤进行实验，避免交叉污染。

试剂瓶盖需紧密封闭，以防蒸发和污染。

试剂体积以实际发货版说明书为准，分装时可能略有盈余。

九、操作步骤

准备：将所需试剂和样本恢复至室温，并准备好实验所需的设备和耗材。

标准品加样：在标准品孔中加入不同浓度的血管生成抑制因子标准品溶液。

样本加样：在样本孔中加入待测样本溶液。

温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育，使捕获抗体与样本中的血管生成抑制因子充分结合。

洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。

加检测抗体：向所有孔中加入适量的酶标抗血管生成抑制因子检测抗体。

再次温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中再次温育，使检测抗体与抗原结合。

再次洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。

加酶标二抗：向所有孔中加入适量的辣根过氧化物酶标记的二抗。

三次温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育。

洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。

显色：向每孔中加入显色剂A和B，避光显色。

终止：显色结束后，向每孔中加入终止液终止反应。

测定：在450nm波长下测定各孔的OD值。

十、试验所需自备物品

酶标仪（450nm波长滤光片）

高精度移液器及吸头

37℃恒温箱

双蒸水或去离子水

吸水纸

十一、结果判断与分析

根据OD值绘制标准曲线，确保曲线的R²值大于0.99。

通过样本的OD值在标准曲线上查找对应的血管生成抑制因子浓度。

试剂盒性能：

1. 检测范围：125 pg/mL – 4000 pg/mL。 

2. 灵敏度：最低检测浓度小于10 pg/mL。 

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。