人白介素6(IL-6)ELISA

人白细胞介素6(IL-6) ELISA说明书.pdf

人白介素6（IL-6）ELISA说明书（高）.pdf

一、产品基本信息

产品名称：人白介素6（IL-6）酶联免疫吸附测定试剂盒
规格：48T/96T
检测原理：本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专为体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等样本中的IL-6浓度而设计。
反应类型：夹心法
反应时间：约4-5小时
反应性：高度特异，仅针对人IL-6，与其他细胞因子无显著交叉反应。
检测方法：比色法（测定波长450nm）
灵敏度：可检测到低于试剂盒最低浓度标准品的IL-6水平。
样本体积：50μL-100μL
样本类型：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等生物样本。
特异性：与IL-1β、IL-2、IL-4、IL-8、IL-10、TNF-α等常见细胞因子无交叉反应。
重复性：板内及板间变异系数（CV）均＜10%，确保结果可靠性。

二、样品处理指南

血清/血浆样本

1. 血液采集后，离心分离血清或血浆（离心条件：3000rpm，10分钟）。

2. 小心吸取上清液，避免吸入细胞成分或沉淀。

3. 将样本分装至洁净离心管，并清晰标注样本来源、采集日期及时间。

4. 长期保存需置于-80℃冰箱，避免反复冻融。

细胞培养上清液

1. 收集处于对数生长期的细胞上清液，确保细胞未受污染或异常刺激。

2. 轻柔混匀后，用无菌吸管或移液器吸取上清液，避免吸入细胞或碎片。

3. 分装样本并标注细胞类型、培养条件及采集日期。

4. 短期保存（≤3天）可置于4℃，长期保存需-80℃冷冻。

组织匀浆

1. 切割组织（去除脂肪、血液等杂质），称取适量组织样本。

2. 加入生理盐水或专用缓冲液（按说明书比例），在冰浴条件下匀浆。

3. 离心去除不溶物（离心条件：12000rpm，15分钟），收集上清液。

4. 分装样本并标注组织类型、来源及处理条件。

5. 长期保存需-80℃冷冻。

三、精密度与回收率

• 精密度：通过低、中、高浓度样本的批内及批间测试，变异系数（CV）均＜10%，确保结果稳定性。

• 回收率：在血清、血浆、细胞培养上清及组织匀浆中添加已知浓度IL-6标准品，回收率范围为90%-110%（具体数值以实际测试结果为准），且线性回收特性良好。

四、试剂盒组成及保存

48孔配置

• 说明书 ×1

• 封板膜 ×2

• 密封袋 ×1

• 酶标包被板（48孔） ×1

• IL-6标准品（0.3mL×6管）

• 酶标试剂（HRP标记抗IL-6抗体） ×5mL

• 样品稀释液 ×6mL

• 显色剂A液 ×6mL

• 显色剂B液 ×6mL

• 终止液 ×3mL

• 20×浓缩洗涤液 ×30mL

96孔配置

• 同48孔配置，各组分数量加倍。

保存条件：2-8℃保存，避免反复冻融和直接光照。

五、注意事项

1. 实验前将所有试剂恢复至室温并充分混匀。

2. 严格按操作步骤执行，避免交叉污染。

3. 试剂瓶盖需密闭，防止蒸发或污染。

4. 试剂体积以实际发货说明书为准，分装时可能略有盈余。

六、操作步骤

1. 准备：将试剂和样本恢复至室温，并准备好实验所需设备。

2. 标准品加样：向标准品孔加入梯度稀释的IL-6标准品。

3. 样本加样：向样本孔加入待测样本（50-100μL）。

4. 加酶：每孔加入适量酶标试剂。

5. 温育：用封板膜封板，置于37℃恒温箱中孵育。

6. 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液洗板5次并拍干。

7. 显色：加入显色剂A和B，避光显色15-30分钟。

8. 终止：加入终止液，立即在450nm波长下测定各孔的OD值。

七、试验所需自备物品

• 酶标仪（配备450nm滤光片）

• 高精度移液器及配套吸头（量程覆盖2-200μL）

• 37℃恒温箱

• 双蒸水或去离子水

• 吸水纸

• 离心机（用于组织匀浆处理）

八、结果判断与分析

1. 绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线（要求相关系数R²＞0.99）。

2. 计算样本浓度：根据待测样本的OD值，从标准曲线上查得对应的IL-6浓度。

3. 数据分析：可计算样本浓度的均值、标准差，并根据需要进行t检验或方差分析等统计检验。