人白介素2(IL-2)ELISA

人白细胞介素2(IL-2) ELISA说明书.pdf

一、产品基本信息

产品名称：人白介素2（IL-2）酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）
规格：48T/96T
检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专门设计用于体外定量检测人血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆或其他相关生物样本中的IL-2浓度。
反应类型：夹心法
反应时间：约4-5小时
反应性：高度特异，仅针对人IL-2，与其他白介素家族成员无明显交叉反应。
检测方法：比色法（450nm波长）
灵敏度：可检测到低于试剂盒最低浓度标准品的IL-2水平。
样本体积：50μL-100μL
样本类型：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等。
特异性：与IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10等常见细胞因子无交叉反应。
重复性：板内及板间变异系数（CV）均＜10%。

二、样品处理指南

血清/血浆样本

1. 采集血液后，离心分离血清或血浆（3000rpm，10分钟）。

2. 收集上清液，避免吸入细胞成分或沉淀。

3. 分装样本并标记来源、采集日期及时间。

4. 长期保存需置于-80℃，避免反复冻融。

细胞培养上清液

1. 收集对数生长期细胞的上清液，避免细胞污染或异常刺激。

2. 轻柔混匀后，吸取上清液（避免吸入细胞或碎片）。

3. 分装并标记细胞类型、培养条件及日期。

4. 短期保存（≤3天）可置于4℃，长期保存需-80℃冷冻。

组织匀浆

1. 切割组织（去除脂肪、血液等），称取适量样本。

2. 加入生理盐水或专用缓冲液（按说明书比例），冰浴匀浆。

3. 离心去除不溶物（12000rpm，15分钟），收集上清液。

4. 分装并标记组织类型、来源及处理条件。

5. 长期保存需-80℃冷冻。

三、精密度与回收率

• 精密度：低、中、高浓度样本的批内及批间CV均＜10%，确保结果稳定性。

• 回收率：在血清、血浆、细胞培养上清及组织匀浆中添加已知浓度IL-2标准品，回收率范围为90%-110%（具体数值以实际测试结果为准），且线性回收特性良好。

四、试剂盒组成及保存

48孔配置

• 说明书 ×1

• 封板膜 ×2

• 密封袋 ×1

• 酶标包被板（48孔） ×1

• IL-2标准品（0.3mL×6管）

• 酶标试剂（HRP标记抗IL-2抗体） ×5mL

• 样品稀释液 ×6mL

• 显色剂A液 ×6mL

• 显色剂B液 ×6mL

• 终止液 ×3mL

• 20×浓缩洗涤液 ×30mL

96孔配置

• 同48孔配置，各组分数量加倍。

保存条件：2-8℃保存，避免反复冻融和直接光照。

五、注意事项

1. 实验前将所有试剂恢复至室温并混匀。

2. 严格按操作步骤执行，避免交叉污染。

3. 试剂瓶盖需密闭，防止蒸发或污染。

4. 试剂体积以实际发货说明书为准，分装时可能略有盈余。

六、操作步骤

1. 准备：试剂和样本恢复至室温，准备实验器材。

2. 标准品加样：向标准品孔加入梯度稀释的IL-2标准品。

3. 样本加样：向样本孔加入待测样本（50-100μL）。

4. 加酶：每孔加入酶标试剂（按说明书比例）。

5. 温育：封板膜封板，37℃恒温箱孵育。

6. 洗涤：弃去液体，用洗涤液洗板5次并拍干。

7. 显色：加入显色剂A和B，避光显色15-30分钟。

8. 终止：加入终止液，立即在450nm波长下测定OD值。

七、试验所需自备物品

• 酶标仪（450nm滤光片）

• 高精度移液器及吸头（2-200μL）

• 37℃恒温箱

• 双蒸水或去离子水

• 吸水纸

• 离心机（用于组织匀浆处理）

八、结果判断与分析

1. 标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制曲线（R²＞0.99）。

2. 浓度计算：根据样本OD值，从标准曲线上查得对应IL-2浓度。

3. 数据分析：计算均值、标准差，必要时进行t检验或方差分析。