一、产品简介
乳酸脱氢酶(LDH)是一种糖酵解酶,广泛存在于人体各组织细胞的胞质内
能催化乳酸氧化成丙酮酸,在细胞能量代谢中起重要作用。它在心肌
肝脏、肾脏、骨骼肌等组织中含量丰富,参与糖代谢的无氧酵解过程。
定义与功能:
定义:LDH是一类能催化乳酸与丙酮酸之间氧化还原反应的酶
在辅酶Ⅰ(NAD⁺)参与下,可逆地将乳酸氧化为丙酮酸。
功能:在细胞能量代谢过程中,LDH主要参与无氧酵解和有氧氧化的衔接
保证细胞在不同氧供条件下的能量供应。当机体处于缺氧状态时
LDH促使丙酮酸还原为乳酸,以维持糖酵解的持续进行,产生能量
在有氧条件下,又能将乳酸氧化为丙酮酸,使其进入三羧酸循环进一步氧化供能
此外,LDH在细胞内环境的稳定以及物质代谢的调节等方面也发挥着重要作用。
催化机制:
LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸的反应,需要辅酶Ⅰ(NAD⁺)作为氢的载体
在反应过程中,LDH特异性地结合乳酸和NAD⁺,使乳酸分子上的α - 羟基氢原子
转移到NAD⁺上,生成丙酮酸和还原型辅酶Ⅰ(NADH)。该反应是可逆的
其方向取决于细胞内乳酸和丙酮酸的浓度以及NAD⁺/ NADH的比值。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行LDH活性测定。通过检测反应体系中特定产物的生成量
或底物的消耗量来计算LDH的酶活性。在特定的反应条件下
LDH催化底物反应,反应产物在特定波长下有特征吸收峰
使用酶标仪测量该波长下吸光度的变化速率,其与LDH的酶活性成正比
通过测定吸光度变化值,依据相关公式即可计算出LDH的酶活性。
重要性:
LDH在临床诊断、生物医学研究等领域具有重要意义。在临床方面
血清或血浆中LDH活性的变化可以反映多种疾病的发生和发展
如心肌梗死、肝病、恶性肿瘤、溶血性疾病等。不同组织来源的LDH同工酶
在疾病诊断中具有更特异的指示作用,通过检测LDH同工酶的组成变化
有助于疾病的定位诊断和病情监测。在生物医学研究中
LDH活性的测定可用于研究细胞代谢、药物对细胞代谢的影响等
为深入了解细胞生理和病理过程提供重要信息。
二、所需的仪器和用品
进行LDH活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量反应产物在特定波长下的光吸收值。酶标仪具有高精度
和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到测定所需的特定波长
同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。UV板具有透明度高
光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取LDH。低温条件有助于保持LDH的活性
减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),并确保离心机已预冷
至适当温度。在离心过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况
若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同的实验需求
调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并且移液过程中要避免气泡
和溅出。在移取不同样品或试剂时,要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在LDH活性测定实验中
研钵可能用于研磨组织等样品,以便提取其中的LDH。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。在LDH活性测定实验中
冰可能用于冷却样品或试剂,以确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以保持其低温效果。