一、产品简介
丙酮酸激酶(PK)是糖酵解途径中的关键酶之一,它在催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)将高能磷酸基团
转移给 ADP 生成 ATP 和丙酮酸的过程中发挥着重要作用。
该反应是糖酵解途径中的限速步骤之一,对于细胞的
能量代谢和物质代谢平衡具有至关重要的意义。
定义与功能:
定义:丙酮酸激酶(PK)是一种能够催化磷酸烯醇式
丙酮酸(PEP)与 ADP 反应生成 ATP 和丙酮酸的酶。
功能:在糖酵解途径中,PK 通过催化 PEP 与 ADP 的
反应,产生 ATP 为细胞提供能量。同时,它也参与
维持细胞内的糖代谢平衡,对于细胞的正常生理功能
和生长发育至关重要。
催化机制:
PK 催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)将高能磷酸基团
转移给 ADP,生成 ATP 和丙酮酸。这一反应是不可逆的,
并且在糖酵解途径中起着关键的调控作用。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行丙酮酸激酶(PK)的活性测定。
通过特定的反应体系和检测方法,在特定波长下检测
反应产物的生成量,从而间接计算出 PK 的酶活性大小。
重要性:
丙酮酸激酶(PK)作为糖酵解途径中的关键酶,其
活性和存在对于细胞的能量代谢、生长发育以及适应
环境变化具有重要意义。通过不断催化 PEP 与 ADP 的
反应,PK 为细胞提供了持续的能量供应,保障了细胞的
正常生理功能。
二、所需的仪器和用品
进行丙酮酸激酶(PK)活性测定实验时,需要以下
仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量反应产物在特定波长下的光吸收值。
酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定
样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到
合适值。同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保
测量结果的准确性。
96 孔板(UV 板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。
UV 板具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于
紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,
并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取丙酮酸
激酶(PK)。低温条件有助于保持 PK 的活性,减少其
在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、
时间等),并确保离心机已预冷至适当温度。在离心
过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况,若
出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器
能够根据不同的实验需求调整移液量,确保实验的
准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行
校准,并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取
不同样品或试剂时,要及时更换移液器头,以防止
交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在
PK 活性测定实验中,研钵可能用于研磨组织等样品,
以便提取其中的 PK。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并
确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解
或变性。在 PK 活性测定实验中,冰可能用于冷却样品
或试剂,以确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并
及时更换以保持其低温效果。