一、产品简介
3 - 磷酸甘油酸激酶(PGK,EC 2.7.2.3)是一种在生物体内参与糖酵解和糖异生途径的关键酶。它广泛存在于各种生物细胞中,在能
量代谢过程中起着至关重要的作用。
定义与功能:
定义:PGK是一种能够催化1,3 - 二磷酸甘油酸和ADP反应生成3
- 磷酸甘油酸和ATP的酶。
功能:在糖酵解和糖异生途径中,PGK通过催化上述反应,实现
能量的转移和物质的转化,对维持细胞内能量平衡和正常代谢水
平起着关键作用。ATP是细胞内重要的能量载体,为细胞的各种生
命活动提供能量。
催化机制:
PGK催化1,3 - 二磷酸甘油酸和ADP反应生成3 - 磷酸甘油酸和ATP
,这一反应在糖酵解和糖异生途径中至关重要。ADP作为磷酸基
团的受体,接受1,3 - 二磷酸甘油酸上的磷酸基团,生成ATP,同
时1,3 - 二磷酸甘油酸转化为3 - 磷酸甘油酸。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行PGK活性测定。通过特定的反应体系,
在特定波长下检测反应产物的生成速率来计算PGK的酶活性大小
。反应产物在特定波长处有特征吸收峰,其生成速率与PGK的酶活
性成正比。通过测定反应体系中反应产物的生成量,可以间接计
算出PGK的酶活性。
重要性:
PGK作为糖酵解和糖异生途径中的关键酶,其活性和存在对于细
胞的能量代谢、维持正常的生理功能以及适应不同的生理状态具
有重要意义。通过不断催化反应的进行,PGK为细胞提供了持续的
能量支持,保障了细胞的正常生长和代谢。
二、所需的仪器和用品
进行PGK活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量反应产物在特定波长下的光吸收值。酶标仪具有
高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸
光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到特定波长。
同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品
和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取PGK。低温条件
有助于保持PGK的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),
并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注离
心机有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不
同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并
且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,要
及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在PGK活性测
定实验中,研钵可能用于研磨生物组织等样品,以便提取其中的
PGK。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨过
程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。在
PGK活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以确保实验
的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以保
持其低温效果。