一、产品简介
NAD+-山梨醇脱氢酶(NAD+-SDH)是一种参与糖代谢过程的酶,在生物体的碳水化合物代谢途径中发挥着重要作用。它能够催化
山梨醇和 NAD+之间的氧化还原反应,对维持细胞内的糖平衡和
能量代谢具有关键意义。
定义与功能:
定义:NAD+-SDH 是一种以 NAD+作为辅酶,催化山梨醇氧化为
果糖并将 NAD+还原为 NADH 的酶。
功能:在生物体的糖代谢中,NAD+-SDH 通过催化山梨醇的氧化
反应,调节细胞内山梨醇和果糖的含量,维持糖代谢的正常进行。
这对于细胞的能量供应、渗透压调节以及应对外界环境变化等
方面都具有重要作用。
催化机制:
NAD+-SDH 催化山梨醇和 NAD+发生氧化还原反应,山梨醇作为
底物被氧化成果糖,同时 NAD+接受电子被还原为 NADH。这一
反应涉及酶与底物、辅酶的特异性结合以及电子传递过程,是
生物体内糖代谢途径中的重要环节。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行 NAD+-SDH 的活性测定。通过在特定
波长下检测反应体系中产物或底物的变化量来计算酶的活性。
具体而言,可通过检测 NADH 的生成量来间接反映 NAD+-SDH 的
酶活性,因为在反应过程中,NAD+被还原为 NADH,而 NADH 在
特定波长下有特征吸收峰,其生成速率与酶的活性成正比。通过
测定反应体系中 NADH 的生成量,可以准确计算出 NAD+-SDH 的
酶活性。
重要性:
NAD+-SDH 作为糖代谢过程中的关键酶,其活性和存在对于生物
体维持正常的生理功能、适应不同的营养环境以及应对代谢
应激具有重要意义。通过调节山梨醇和果糖的代谢,NAD+-SDH 为
生物体提供了稳定的能量供应和渗透压调节机制,保障了细胞
的正常生长和发育。
二、所需的仪器和用品
进行 NAD+-SDH 活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量反应体系在特定波长下的光吸收值。酶标仪具
有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下
的吸光度值,从而间接反映酶的活性。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到合适的
检测波长。同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量
结果的准确性。
96 孔板(UV 板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。UV 板
具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且
样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取 NAD+-SDH。低
温条件有助于保持酶的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),
并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注
离心机有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据
不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,
并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,
要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在 NAD+-SDH
活性测定实验中,研钵可能用于研磨生物组织等样品,以便
提取其中的酶。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨
过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。
在 NAD+-SDH 活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以
确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以
保持其低温效果。