一、产品简介
NADH - 谷氨酸合成酶(NADH - GOGAT)在植物的氮代谢过程中起着关键作用,它广泛存在于植物的非绿色组织里,对维持植物体内的氮素平衡和正常生长发育至关重要。
定义与功能:
定义:NADH - GOGAT是一种能够催化α - 酮戊二酸和谷氨酰胺反应生成谷氨酸的酶,
该过程需要NADH作为辅酶。
功能:在植物的氮代谢途径中,NADH - GOGAT通过催化上述反应,
将无机氮转化为有机氮,参与蛋白质、核酸等生物大分子的合成,
保证植物正常的生长和发育。同时,它对于植物适应氮素营养变化和环境胁迫也具有重要意义。
催化机制:
NADH - GOGAT催化α - 酮戊二酸和谷氨酰胺反应生成谷氨酸,
在这个过程中,NADH作为电子供体提供电子,使得反应能够顺利进行。
谷氨酰胺的酰胺基被转移到α - 酮戊二酸上,生成两分子谷氨酸,
同时NADH被氧化为NAD⁺。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行NADH - GOGAT活性的测定。
通过在特定波长下检测反应体系中NADH的氧化速率来计算NADH - GOGAT的酶活性大小。
NADH在特定波长处有特征吸收峰,其氧化速率与NADH - GOGAT的酶活性成正比。
通过测定反应体系中NADH的减少量,可以间接计算出NADH - GOGAT的酶活性。
重要性:
NADH - GOGAT作为植物氮代谢中的关键酶,其活性和存在对于植物的氮素吸收、
同化以及利用具有重要意义。通过不断催化α - 酮戊二酸和谷氨酰胺反应生成谷氨酸,
NADH - GOGAT为植物提供了必要的有机氮源,保障了植物的正常生长和发育,
提高植物对氮素营养的利用效率以及对环境的适应能力。
二、所需的仪器和用品
进行NADH - GOGAT活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量NADH在特定波长处的光吸收值。
酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到合适的数值。
同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。
UV板具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取NADH - GOGAT。
低温条件有助于保持NADH - GOGAT的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),
并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况,
若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。
可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,
并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,要及时更换移液器头,
以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。
在NADH - GOGAT活性测定实验中,研钵可能用于研磨植物的非绿色组织样品,
以便提取其中的NADH - GOGAT。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,
并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。
在NADH - GOGAT活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以保持其低温效果。