一、产品简介
NADH - 谷氨酸脱氢酶(NADH - GDH)广泛存在于植物和动物体内,是参与氨基酸代谢的一种重要酶。它在细胞的能量代谢和氮代谢过程中,
发挥着关键作用。
定义与功能:
定义:NADH - GDH是一种能够催化谷氨酸脱氢生成α - 酮戊二酸,
和氨,同时使NADH氧化为NAD⁺的酶。
功能:在生物体的代谢过程中,NADH - GDH通过催化谷氨酸的脱氢,
反应,参与氨基酸的分解代谢和合成代谢,维持细胞内氮平衡和能量,
平衡。它对于植物和动物的生长、发育和应激反应等生理过程具有,
重要意义。
催化机制:
NADH - GDH催化谷氨酸脱氢,在辅酶NADH的参与下,谷氨酸失去,
氨基生成α - 酮戊二酸和氨,同时NADH被氧化为NAD⁺。这一反应在,
细胞的代谢网络中起到了连接碳代谢和氮代谢的桥梁作用。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行NADH - GDH活性测定。通过检测反应体系,
中NADH在特定波长下的吸光度变化来计算NADH - GDH的酶活性大小。
NADH在特定波长处有特征吸收峰,其吸光度的变化速率与NADH - GDH,
的酶活性成正比。通过测定反应过程中吸光度的变化量,可以间接,
计算出NADH - GDH的酶活性。
重要性:
NADH - GDH作为参与氨基酸代谢的关键酶,其活性和存在对于植物,
和动物维持正常的生理功能、适应环境变化具有重要意义。在植物中,
它有助于植物在不同氮源条件下的生长和发育;在动物中,它与蛋白,
质代谢和能量代谢密切相关。通过不断催化谷氨酸的脱氢反应,NADH,
- GDH为生物体提供了必要的代谢中间产物和能量,保障了生物体的,
正常生长和发育。
二、所需的仪器和用品
进行NADH - GDH活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量NADH在特定波长下的光吸收值。酶标仪具有高精,
度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到特定波长。同,
时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。UV板具有,
透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和,
试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取NADH - GDH。低温,
条件有助于保持NADH - GDH的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),并,
确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注离心机有,
无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同,
的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并且,
移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,要及时更,
换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在NADH - GDH活,
性测定实验中,研钵可能用于研磨植物或动物组织等样品,以便提取,
其中的NADH - GDH。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨过程,
中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。在NADH,
- GDH活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以确保实验的,
准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以保持,
其低温效果。