一、产品简介
锰过氧化物酶（Manganese Peroxidase，简称Mnp，EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌等真菌中，也可能存在于某些细菌和植物中。它属于木质素降解酶系，能够催化木质素及废水和土壤中较难降解的氯化物、叠氮化合物、DTT和多环芳烃等物质的氧化反应。本试剂盒提供了一种灵敏、快速、简便的方法，用于检测生物样品中Mnp的活性，适用于科学研究、环境监测、生物降解等领域。
二、测定原理
在Mn²⁺存在的条件下，锰过氧化物酶能将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚。这种产物在465nm或470nm波长下有特征吸收峰，通过光度法测定其吸光度，可以间接测定锰过氧化物酶的活性。
三、试剂盒组成
提取液：用于提取样品中的Mnp酶，规格为液体100mL×2瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
其他辅助试剂：如终止液、洗涤液等，根据具体实验需求提供。
四、所需仪器与用品
可见分光光度计/酶标仪：预热30min以上，调节波长至465nm或470nm，用于测定吸光度。
台式离心机：用于分离样品中的固体和液体成分，提取Mnp酶。
可调式移液器：用于精确移取样品溶液和试剂。
1mL玻璃比色皿/96孔酶标板：用于盛放反应液，进行吸光度测定。
其他常用实验用品：如冰、蒸馏水、玻璃器皿、天平等。
五、实验步骤
样本制备：
取新鲜土样风干或37℃烘箱风干，先粗研磨，过40目筛备用。
称取约0.1g样本，加入1mL提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min）。
4℃，500g离心5min，取上清测定。
上机检测：
可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至465nm或470nm，蒸馏水调零。
在EP管中依次加入试剂和样本（具体加入量根据试剂盒说明书调整），充分混匀。
于适宜温度（如30℃）震荡反应一定时间（如2h）。
离心后取上清液至比色皿/酶标板中，读取吸光值。
结果计算：
根据吸光值的变化计算Mnp的活性，具体计算公式请参考试剂盒说明书。
六、注意事项
样品处理：样品应新鲜采集，避免长时间暴露于空气中导致酶活性丧失。采集后应尽快进行提取和测定。
试剂保存：试剂盒中的试剂应严格按照说明书要求保存，避免受潮、变质。使用前应检查试剂的有效期和保存条件。
操作规范：实验过程中应严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性。特别是要注意反应时间、温度等条件的控制。
安全防护：实验过程中应佩戴好个人防护装备，如手套、口罩等，避免试剂对人体造成伤害。
XM-F-BBW008 锰过氧化物酶（Mnp)说明书-分光法48样.docx
XM-W-BBW008 锰过氧化物酶（Mnp)说明书-微板法96样.docx
