肉桂酸4-羟基化酶(C4H)试剂盒

一、产品简介

肉桂酸-4-羟基化酶（C4H，EC 1.14.13.11）是苯丙烷类代谢途径中的关键酶，在植物次生代谢产物的合成中发挥着重要作用。

1. 定义与功能：

• 定义：C4H，又称反式肉桂酸-4-单氧化酶，是一种催化肉桂酸生成4-羟基反式肉桂酸的酶。

• 功能：C4H在苯丙烷类代谢途径中起着关键作用，可有效调节黄酮类化合物等次生代谢产物的合成。这些次生代谢产物对植物的生长发育、抗逆性等方面具有重要影响。

2. 催化机制：

• C4H催化肉桂酸和NADPH（或NADP+）生成4-羟基反式肉桂酸和NADP+（或NADPH）。

• 在这一反应过程中，C4H通过其独特的活性位点识别并降解肉桂酸，生成具有生物活性的4-羟基反式肉桂酸。

3. 活性测定方法：

• 本产品测试原理是以肉桂酸作为底物，在酶促反应的最适条件下，C4H催化底物生成4-羟基反式肉桂酸。

• 在最佳pH值下，产物4-羟基反式肉桂酸在340nm波长处有最大吸收峰。

• 通过测定340nm波长处吸光值的增加速率，可以计算出C4H的活性大小。这一方法具有简单、灵敏、快速等优点，适用于实验室中C4H活性的常规测定。

4. 生理意义与应用：

• C4H的活性可作为植物抗性的一个生理指标。在逆境条件下，植物体内C4H的活性往往会发生变化，从而影响次生代谢产物的合成和植物的抗逆性。

• 通过测定C4H的活性，可以了解植物体内次生代谢产物的合成情况，为植物遗传改良、分子育种以及植物抗性研究提供重要依据。

二、所需用的仪器与用品

进行C4H活性测定实验时，需要以下仪器和用品：

1. 酶标仪

• 用途：用于测定340nm波长处4-羟基反式肉桂酸的吸光值。酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点，能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。

• 注意事项：在使用前需要预热酶标仪，并调节波长到340nm。同时，要保持孔板洁净无异物遮盖，以确保测量结果的准确性。

2. 96孔板

• 用途：用于盛放待测样品溶液和试剂，便于高通量测定。96孔板具有多个小孔，可以同时处理多个样品，提高实验效率。

• 注意事项：在使用前需要确保每个小孔都干净无污染，并且样品和试剂的加入量要准确。

3. 台式离心机

• 用途：用于分离样品中的固体和液体成分，提取C4H或去除杂质。台式离心机具有操作简便、转速可调等特点，适用于实验室中的常规离心操作。

• 注意事项：在使用前需要设置好离心参数（如转速、时间等），并确保离心机已平衡。在离心过程中，要密切关注离心机有无异常声音等状况。

4. 可调式移液器

• 用途：用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量，确保实验的准确性和重复性。

• 注意事项：在使用移液器时，需要确保其已进行校准，并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时，要及时更换移液器头，以防止交叉污染。

5. 研钵

• 用途：用于研磨植物组织或细胞等样品，以便提取其中的C4H。研钵具有操作简便、研磨效果好等特点，适用于实验室中的样品前处理。

• 注意事项：在使用研钵时，要保持其干净无污染，并确保研磨过程中样品不会受到污染。

6. 冰

• 用途：用于保持样品在低温条件下，防止其发生降解或变性。在C4H活性测定实验中，冰可能用于冷却样品或试剂，以确保实验的准确性。

• 注意事项：在使用冰时，要确保其干净无污染，并及时更换以保持其低温效果。

7. 蒸馏水

• 用途：用于配制试剂、稀释样品或清洗仪器等。蒸馏水具有纯净度高、无杂质等特点，是实验中常用的溶剂。

• 注意事项：在使用蒸馏水时，要确保其质量符合实验要求，并避免受到污染。

XM-W-BBW001-48T肉桂酸4-羟基化酶（C4H)试剂盒说明书-微板法-48样.docx

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