品名称：小鼠 CD48 抗原 (CD48) ELISA 科研试剂盒（夹心法）
规格：48T/96T
检测原理：本试剂盒运用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）技术，专为体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆或其他相关生物样本中的 CD48 抗原水平而设计。在实验过程中，预先包被特异性抗 CD48 抗体的酶标板会与加入的样本进行反应，样本中的 CD48 抗原与抗体特异性结合，形成抗原 - 抗体复合物。随后通过洗涤步骤去除未结合的物质，再加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，该抗体能够与之前形成的抗原 - 抗体复合物相结合。之后加入显色底物，在辣根过氧化物酶的催化作用下，底物发生显色反应，颜色的深浅与样本中 CD48 抗原度呈正相关。最后，使用酶标仪在 450nm 波长处测定吸光度（OD 值），并依据预先绘制好的标准曲线计算出样本中 CD48 抗原的浓度。
反应类型：夹心法
反应时间：约 4 - 5 小时
反应性：高度特异，仅针对小鼠 CD48 抗原，与其他物质交叉反应极小。
检测方法：比色法敏度：可检测到低于试剂盒提供的最低浓度标准品的 CD48 抗原，不同产品灵敏度存在差异，一般能达到 0.05 - 0.15ng/mL 左右。
样本体积：100μL
样本类型：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆或其他相关生物样本
二、样品处理
血清和血浆样本处理：
采集血液后，尽快将血液置于无菌试管中，并按照标准程序进行离心以分离血清或血浆。
离心后，小心收集上清液（血清或血浆），避免吸入任何细胞成分或沉淀。
将收集到的血清或血浆样本分装至干净的离心管中，并标记清楚样本来源、采集日期和具体时间。
若需长期保存，应将样本置于-80℃或更低温度下冷冻保存，并避免反复冻融。
细胞培养上清液处理：
收集处于对数生长期的细胞培养上清液，确保细胞未受到异常刺激或污染。
轻轻摇晃培养瓶或培养板，以充分混匀培养上清液。
使用无菌吸管或移液器小心吸取上清液，避免吸入任何细胞或碎片。
将收集到的上清液分装至干净的离心管中，并标记清楚细胞类型、培养条件和采集日期。
若需长期保存，应将样本置于-80℃或更低温度下冷冻保存。
组织匀浆处理：
取适量新鲜或冷冻的组织样本，使用无菌手术器械将组织切割成小块，并去除任何明显的脂肪、血液或坏死部分。
将组织块置于匀浆器中，加入适量生理盐水或特定的组织匀浆缓冲液（根据试剂盒说明书推荐）进行匀浆，保持冰浴以避免蛋白酶降解。
匀浆完成后，将匀浆液离心以去除不溶性物质和细胞碎片。
收集上清液，并分装至干净的离心管中，标记清楚组织类型、来源和处理条件。
若需长期保存，应将样本置于-80℃或更低温度下冷冻保存。
三、精密度与回收率
精密度：通过低、中、高浓度样本的批内及批间变异系数评估，均小于10%，确保结果的稳定性和可靠性。
回收率：在血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等样本中添加已知浓度的THBS2标准品，回收率范围及平均回收率如下表所示（实际表格数据未列出，因不添加具体数据），且
在不同稀释度下表现出良好的线性回收特性。
四、试剂盒组成及保存
48孔配置：说明书1份、封板膜2片、密封袋1个、酶标包被板1×48、标准品0.3ml×6管、酶标试剂5ml×1瓶、样品稀释液6ml×1瓶、显色剂A液6ml×1瓶、显色剂B液6ml×1瓶、
终止液3ml×1瓶、20×浓缩洗涤液30ml×1瓶。
96孔配置：同上，但各组分数量加倍。
保存条件：按说明书指示保存于2-8℃，避免反复冻融和直接光照。
五、注意事项
使用前请确保所有试剂恢复至室温并充分混匀。
严格按照操作步骤进行实验，避免交叉污染。
试剂瓶盖需紧密封闭，以防蒸发和污染。
试剂体积以实际发货版说明书为准，分装时可能略有盈余。
六、操作步骤
准备：将所需试剂和样本恢复至室温，并准备好实验所需的设备和耗材。
标准品加样：在标准品孔中加入不同浓度的标准品溶液。
样本加样：在样本孔中加入待测样本溶液。
加酶：向所有孔中加入适量的酶标试剂。
温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育。
洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。
显色：向每孔中加入显色剂A和B，避光显色。
终止：显色结束后，向每孔中加入终止液终止反应。
测定：在450nm波长下测定各孔的OD值。
七、试验所需自备物品
酶标仪（450nm波长滤光片）
高精度移液器及吸头
37℃恒温箱
双蒸水或去离子水
吸水纸
离心机（用于处理细胞培养上清和组织匀浆）
八、结果判断与分析
根据OD值绘制标准曲线，确保曲线的R²值大于0.99。
通过样本的OD值在标准曲线上查找对应的THBS2浓度。
根据实验需求对数据进行统计分析，如计算均值、标准差、t检验或方差分析等。
特异性：与小鼠体内其他相关蛋白无明显交叉反应，保证检测结果的准确性和可靠性。离心完成后，小心地收集上清液（即血清或血浆），操作过程中要特别注意避免吸入任何细胞成分或沉淀，防止对样本造成污染。
将收集到的血清或血浆样本分装到干净的离心管中，并清晰、准确地标记好样本的来源、采集日期以及具体时间，以便后续实验及数据追溯。
若需要对样本进行长期保存，应将其置于 - 80℃或更低温度的环境下冷冻保存，同时要避免样本反复冻融，因为反复冻融可能会影响样本中 CD48 抗原的活性，进而影响检测结果的准确性。
选择处于对数生长期的细胞培养上清液进行收集，这一时期的细胞状态良好，培养上清液中的成分相对稳定，更有利于准确检测 CD48 抗原水平。同时，要确保细胞未受到异常刺激或污染，以免干扰实验结果。
在收集前，轻轻摇晃培养瓶或培养板，使培养上清液充分混匀，保证样本的均一性。
使用无菌的吸管或移液器小心地吸取上清液，操作时要避免吸入任何细胞或碎片，防止对样本造成污染，影响检测结果。
