小鼠醛固酮 (ALD)ELISA

小鼠醛固酮(ALD) ELISA说明书.pdf

一、产品基本信息

产品名称：小鼠醛固酮（ALD）ELISA试剂盒
规格：48T/96T
检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物样本中的醛固酮（ALD）含量。

• 酶标板预包被高特异性抗小鼠ALD单克隆抗体（捕获抗体），与样本中的ALD结合形成抗原-抗体复合物。

• 加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，与ALD另一表位结合，形成“捕获抗体-ALD-检测抗体”夹心结构。

• 加入显色底物（TMB），在HRP催化下产生蓝色产物，颜色深浅与ALD浓度成正比。

• 终止反应后，通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度（OD值），结合标准曲线计算样本中ALD浓度。

反应类型：夹心法
反应时间：约4小时
反应性：高度特异，仅识别小鼠醛固酮，与其他类固醇激素无交叉反应。
检测方法：比色法
灵敏度：最低检测限≤5 pg/mL
样本体积：50-100μL
样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、尿液等。
特异性：与小鼠皮质醇、皮质酮等类固醇激素交叉反应率＜0.1%。
重复性：板内变异系数（CV）＜8%，板间变异系数（CV）＜10%。

二、样本处理要求

1. 血清/血浆：

• 采集后30分钟内离心（3000 rpm，10分钟），分离上清，避免溶血或高脂血样本。

• 长期保存需分装至-80℃，避免反复冻融（≤3次）。

2. 组织匀浆：

• 新鲜组织（如肾上腺、肾脏）用预冷PBS清洗，按1:10（w/v）加入含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。

• 冰浴匀浆后，4℃离心（12000 rpm，15分钟），取上清。

• 短期保存于-20℃，长期保存于-80℃。

3. 细胞培养上清：

• 收集对数生长期细胞上清，4℃离心（2000 rpm，5分钟）去除细胞碎片。

• 分装后标记细胞类型、处理条件及日期，-80℃保存。

4. 尿液：

• 收集后离心（3000 rpm，10分钟），取上清直接检测或稀释后检测。

三、精密度与回收率

• 精密度：低、中、高浓度质控样本的批内CV≤5%，批间CV≤8%。

• 回收率：在血清、血浆、组织匀浆中添加重组ALD标准品，回收率范围为95%-105%，且线性相关系数（R²）＞0.99。

四、试剂盒组成及保存

48孔配置：

• 说明书×1

• 封板膜×2

• 密封袋×1

• 酶标包被板×1（48孔）

• 标准品（重组小鼠ALD，0.3mL×6管）

• 酶标试剂×1（5mL，HRP标记抗ALD抗体

• 样品稀释液×1（6mL）

• 显色剂A/B液×1（各6mL）

• 终止液×1（3mL）

• 浓缩洗涤液×1（30mL，20×）
  96孔配置：各组分数量加倍。
  保存条件：2-8℃避光保存，有效期12个月。

五、注意事项

1. 实验前所有试剂需平衡至室温（20-25℃），避免反复冻融标准品。

2. 显色剂A/B需避光保存，按比例现用现配。

3. 洗涤时需彻底拍干酶标板，避免残留液体影响结果。

4. 试剂瓶盖需紧密封闭，防止蒸发或污染。

5. 样本中若含有颗粒物，需离心后取上清检测。

六、操作步骤简述

1. 准备：试剂及样本恢复至室温，配置洗涤液（1×）。

2. 加样：标准品孔加入梯度浓度标准品（0-500 pg/mL），样本孔加入待测样本。

3. 加酶：每孔加入50μL酶标试剂（空白孔除外）。

4. 温育：封板后37℃恒温孵育60分钟。

5. 洗涤：弃液，用洗涤液注满各孔，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

6. 显色：每孔加入50μL显色剂A和50μL显色剂B，37℃避光显色15分钟。

7. 终止：每孔加入50μL终止液，15分钟内测定OD值（450nm）。

七、试验所需自备物品

• 酶标仪（450nm滤光片）

• 高精度移液器（2-20μL、20-200μL、200-1000μL）及吸头

• 37℃恒温箱

• 双蒸水/去离子水

• 吸水纸

• 离心机（用于细胞培养上清及组织匀浆处理）

八、结果判断与分析

1. 标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制四参数逻辑曲线，确保R²＞0.99。

2. 浓度计算：根据样本OD值在标准曲线上查得对应ALD浓度，或通过试剂盒配套软件自动计算。

3. 统计分析：支持均值、标准差、t检验、ANOVA等分析（建议使用GraphPad Prism或SPSS）。

注：本试剂盒仅供科研使用，操作需符合实验室生物安全规范。