小鼠谷氨酰胺(Gln)ELISA

Mouse/小鼠Elisa试剂盒

货号

规格

检测方法

目录价

M-E-M2618-48T48T竞争法1800
M-E-M2618-96T96T竞争法2300
M-E-M2618-48T(高)48T竞争法2200
M-E-M2618-96T(高)96T竞争法2950



小鼠谷氨酸(GLU)ELISA说明书(高).pdf

一、产品基本信息

产品名称:小鼠谷氨酰胺(Gln)ELISA试剂盒
规格:48T/96T
检测原理:本试剂盒采用竞争抑制酶联免疫吸附法(ELISA),用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及其他生物样本中的谷氨酰胺(Gln)含量。

  • 酶标板预包被谷氨酰胺特异性抗原。实验时,样本中的Gln与酶标抗原竞争结合有限量的抗Gln抗体,未结合的成分经洗涤去除。

  • 加入显色底物(TMB)后,颜色深浅与样本中Gln浓度成反比(Gln浓度越高,颜色越浅)。

  • 通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度(OD值),结合标准曲线计算样本中Gln浓度。

反应类型:竞争法
反应时间:约4小时
反应性:高度特异,仅识别小鼠谷氨酰胺,与其他氨基酸(如谷氨酸、天冬氨酸)无交叉反应。
检测方法:比色法
灵敏度:最低检测限≤10 μmol/L
样本体积:50-100μL
样本类型:血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、脑脊液、尿液等。
特异性:与谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、丙氨酸(Ala)等氨基酸交叉反应率<0.1%。
重复性:板内变异系数(CV)<8%,板间变异系数(CV)<10%。

二、样本处理要求

  1. 血清/血浆

    • 采集后30分钟内离心(3000 rpm,10分钟),分离上清,避免溶血或高脂血样本。

    • 长期保存需分装至-80℃,避免反复冻融(≤3次)。

  2. 细胞培养上清

    • 收集对数生长期细胞上清(如肿瘤细胞、免疫细胞),4℃离心(2000 rpm,5分钟)去除细胞碎片。

    • 分装后标记细胞类型、培养条件及日期,-80℃保存。

  3. 组织匀浆

    • 新鲜组织(如肝脏、肌肉)用预冷PBS清洗,按1:10(w/v)加入含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。

    • 冰浴匀浆后,4℃离心(12000 rpm,15分钟),取上清。

    • 短期保存于-20℃,长期保存于-80℃。

  4. 脑脊液/尿液

    • 收集后离心(3000 rpm,10分钟),取上清直接检测或稀释后检测。

三、精密度与回收率

  • 精密度:低、中、高浓度质控样本的批内CV≤5%,批间CV≤8%。

  • 回收率:在血清、血浆、细胞培养上清中添加已知浓度Gln标准品,回收率范围为90%-110%,且线性相关系数(R²)>0.99。

四、试剂盒组成及保存

48孔配置

  • 说明书×1、封板膜×2、密封袋×1、酶标包被板×1(48孔)、标准品(谷氨酰胺,0.3mL×6管)、酶标试剂×1(5mL,HRP标记抗Gln抗体)、样品稀释液×1(6mL)、显色剂A/B液×1(各6mL)、终止液×1(3mL)、浓缩洗涤液×1(30mL,20×)。
    96孔配置:各组分数量加倍。
    保存条件:2-8℃避光保存,有效期12个月。

五、注意事项

  1. 实验前所有试剂需平衡至室温(20-25℃),避免反复冻融标准品。

  2. 显色剂A/B需避光保存,按比例现用现配。

  3. 洗涤时需彻底拍干酶标板,避免残留液体影响结果。

  4. 试剂瓶盖需紧密封闭,防止蒸发或污染。

  5. 样本中若含有颗粒物,需离心后取上清检测。

六、操作步骤简述

  1. 准备:试剂及样本恢复至室温,配置洗涤液(1×)。

  2. 加样:标准品孔加入梯度浓度标准品(0-2000 μmol/L),样本孔加入待测样本。

  3. 加酶:每孔加入50μL酶标试剂(空白孔除外)。

  4. 温育:封板后37℃恒温孵育60分钟。

  5. 洗涤:弃液,用洗涤液注满各孔,静置30秒后弃去,重复5次,拍干。

  6. 显色:每孔加入50μL显色剂A和50μL显色剂B,37℃避光显色15分钟。

  7. 终止:每孔加入50μL终止液,15分钟内测定OD值(450nm)。

七、试验所需自备物品

  • 酶标仪(450nm滤光片)

  • 高精度移液器(2-20μL、20-200μL、200-1000μL)及吸头

  • 37℃恒温箱

  • 双蒸水/去离子水

  • 吸水纸

  • 离心机(用于细胞培养上清及组织匀浆处理)

八、结果判断与分析

  1. 标准曲线:以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制四参数逻辑曲线,确保R²>0.99。

  2. 浓度计算:根据样本OD值在标准曲线上查得对应Gln浓度,或通过试剂盒配套软件自动计算。

  3. 统计分析:支持均值、标准差、t检验、ANOVA等分析(建议使用GraphPad Prism或SPSS)。

:本试剂盒仅供科研使用,操作需符合实验室生物安全规范。