小鼠Vinculin(VCL)ELISA

一、产品基本属性

产品名称：小鼠Vinculin(VCL)ELISA夹心法科研试剂盒

规格：48T/96T

检测原理：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专为体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清、组织提取物或其他相关生物样本中的VCL水平而设计。

实验流程中，预先包被有特异性抗VCL抗体的酶标板与样本中的VCL蛋白结合，形成稳定的抗原-抗体复合物。

洗涤去除未结合物质后，加入酶标记的检测抗体，该抗体特异性地与抗原-抗体复合物结合。

随后，加入显色底物，在酶催化下发生颜色变化，颜色深浅与VCL蛋白的浓度呈正相关。

利用酶标仪在450nm波长下测量各孔的吸光度（OD值），并依据标准曲线计算出样本中VCL蛋白的浓度。

用途：
适用于科研及临床前研究，用于探究VCL在细胞黏附、迁移及形态维持中的作用，评估药物对VCL表达的影响，以及潜在疾病生物标志物的探索等。

反应类型：夹心法

反应时间：约3.5-4.5小时

反应性：高度特异，针对小鼠VCL蛋白

检测方法：比色法

灵敏度：能够检测到低于试剂盒最低浓度标准品的VCL蛋白

样本体积：50-100μL（根据实验需求调整）

样本类型：血清、血浆、细胞培养上清、组织提取物或其他相关生物样本

特异性：与其他相关蛋白无显著交叉反应

重复性：板内及板间变异系数均小于10%

二、样品处理与准备方法

血清/血浆：直接取用或按适当比例稀释后使用，无需特殊活化处理。

细胞培养上清：通过离心去除细胞碎片后，直接取用上清液或按比例稀释后使用。

组织提取物：取适量组织提取物，加入样本稀释液进行适当稀释，确保VCL蛋白浓度在检测范围内。

三、精密度与回收率

精密度：
通过低、中、高浓度样本的批内及批间变异系数评估，均保持在10%以下，确保实验结果的稳定性和可靠性。

回收率：
在血清、血浆、细胞培养上清、组织提取物等样本中添加已知浓度的VCL标准品，回收率范围及平均回收率符合标准，且在不同稀释度下展现出良好的线性回收特性。

四、试剂盒组成及保存条件

48孔配置：
说明书1份
封板膜2片
密封袋1个
酶标包被板1×48
标准品0.5ml×6管
酶标试剂3ml×1瓶
样本稀释液5ml×1瓶
显色剂A液5ml×1瓶
显色剂B液5ml×1瓶
终止液2.5ml×1瓶
20×浓缩洗涤液25ml×1瓶

96孔配置：
同上，但各组分数量相应加倍

保存条件：
请按说明书指示于2-8℃保存，避免反复冻融和直射阳光照射。

五、试剂盒性能

灵敏度：能够检测到极低浓度的VCL蛋白，低于最低浓度标准品。

特异性：与其他蛋白无交叉反应，保证结果准确性。

重复性：变异系数低，确保实验结果的稳定性和一致性。

六、注意事项

使用前，请确保所有试剂回温至室温并充分混匀。

严格遵循操作步骤进行实验，防止交叉污染。

试剂瓶盖需紧密封闭，以防蒸发和污染。

试剂体积以实际发货版说明书为准，分装时可能有少量盈余。

七、操作步骤

准备：将所有试剂和样本回温至室温，并准备好实验所需设备和耗材。

标准品加样：在标准品孔中加入不同浓度的标准品溶液。

样本加样：在样本孔中加入待测样本溶液。

加酶：向所有孔中加入适量的酶标试剂。

温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育。

洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤数次，拍干。

显色：向每孔中加入显色剂A和B，避光显色。

终止：显色结束后，向每孔中加入终止液终止反应。

测定：在450nm波长下测定各孔的OD值。

八、试验所需自备物品

酶标仪（450nm波长滤光片）

高精度移液器及吸头

37℃恒温箱

双蒸水或去离子水

吸水纸

离心机（用于处理细胞培养上清和组织提取物）

九、结果判断与分析

根据OD值绘制标准曲线，确保曲线的R²值大于0.99。

通过样本的OD值在标准曲线上查找对应的VCL蛋白浓度。

根据实验需求对数据进行统计分析，如计算均值、标准差、进行t检验或方差分析等。