小鼠中期因子(MK)ELISA

一、产品基本属性

产品名称：小鼠中期因子(MK)ELISA科研试剂盒

规格：48T/96T

检测原理：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专门设计用于体外定量检测小鼠血清、血浆、细胞培养液、组织提取物或其他相关生物样本中的MK水平。

实验过程中，酶标板预包被有特异性抗MK抗体，与样本中的MK结合形成抗原-抗体复合物。

经过洗涤去除未结合成分后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，该抗体与抗原-抗体复合物特异性结合。

加入显色底物，在辣根过氧化物酶的作用下，底物发生颜色反应，颜色深浅与MK的浓度成正比。

使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中MK的浓度。

用途：
适用于科研及临床前研究，用于探究MK在疾病发生发展中的作用，评估药物疗效，以及寻找新的治疗靶点等。

反应类型：夹心法

反应时间：约3.5-4.5小时

反应性：高度特异，针对小鼠MK

检测方法：比色法

灵敏度：能够检测到低于试剂盒提供的最低浓度标准品的MK

样本体积：100μL

样本类型：血清、血浆、细胞培养液、组织提取物或其他相关生物样本

特异性：与其他相关蛋白无明显交叉反应

重复性：板内及板间变异系数均小于10%

二、样品处理与活化方法

血清/血浆：直接取用或按一定比例稀释后使用，无需额外活化步骤。

细胞培养液：离心去除细胞及碎片后，直接取用上清液或按一定比例稀释后使用。

组织提取物：取适量组织提取物，加入适量的样本稀释液进行稀释，确保样本中的MK浓度在检测范围内。

三、精密度与回收率

精密度：
通过低、中、高浓度样本的批内及批间变异系数评估，均小于10%，确保检测结果的稳定性和可靠性。

回收率：
在血清、血浆、细胞培养液、组织提取物等样本中添加已知浓度的MK标准品，回收率范围及平均回收率符合预设标准，且在不同稀释度下表现出良好的线性回收特性。

四、试剂盒组成及保存

48孔配置：
说明书1份
封板膜2片
密封袋1个
酶标包被板1×48
MK标准品0.3ml×6管
酶标试剂5ml×1瓶
样品稀释液6ml×1瓶
显色剂A液6ml×1瓶
显色剂B液6ml×1瓶
终止液3ml×1瓶
20×浓缩洗涤液30ml×1瓶

96孔配置：
同上，但各组分数量加倍

保存条件：
按说明书指示保存于2-8℃，避免反复冻融和直接光照，确保试剂的稳定性。

五、试剂盒性能

灵敏度：能够检测到低于最低浓度标准品的MK水平。

特异性：与其他相关蛋白无交叉反应，确保检测结果的准确性。

重复性：变异系数低，保证实验结果的稳定性和可靠性，便于不同批次间的数据比较。

六、注意事项

使用前请确保所有试剂恢复至室温并充分混匀，避免温度差异影响检测结果。

严格按照操作步骤进行实验，避免交叉污染，确保实验结果的准确性。

试剂瓶盖需紧密封闭，以防蒸发和污染，影响试剂的稳定性和有效期。

试剂体积以实际发货版说明书为准，分装时可能略有盈余，请按说明使用。

七、操作步骤

准备：将所需试剂和样本恢复至室温，并准备好实验所需的设备和耗材。

标准品加样：在标准品孔中加入不同浓度的MK标准品溶液。

样本加样：在样本孔中加入待测样本溶液。

加酶：向所有孔中加入适量的酶标试剂。

温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育。

洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤若干次（如5次），拍干。

显色：向每孔中加入显色剂A和B，避光显色。

终止：显色结束后，向每孔中加入终止液终止反应。

测定：在450nm波长下测定各孔的OD值。

八、试验所需自备物品

酶标仪（450nm波长滤光片）

高精度移液器及吸头

37℃恒温箱

双蒸水或去离子水

吸水纸

离心机（用于处理细胞培养液和组织提取物）

九、结果判断与分析

根据OD值绘制标准曲线，确保曲线的R²值大于0.99，保证标准曲线的准确性。

通过样本的OD值在标准曲线上查找对应的MK浓度。

根据实验需求对数据进行统计分析，如计算均值、标准差、进行t检验或方差分析等，以探究MK在样本中的分布规律和差异。