小鼠游离血红蛋白(f-Hb)ELISA

一、产品基本属性

产品名称：小鼠游离血红蛋白(f-Hb)ELISA竞争法科研试剂盒 规格：48T/96T 检测原理： 本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附法（ELISA），专门设计用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织液或其他相关生物样本中的游离血红蛋白（f-Hb）水平。 实验过程中，酶标板预包被有特异性抗f-Hb抗体，同时加入样本和已知浓度的f-Hb标准品（标记有酶标记物），它们与预包被的抗体竞争结合，形成抗原-抗体复合物。 经过洗涤去除未结合成分后，加入显色底物，在酶的作用下，未与样本中f-Hb结合的酶标抗体将催化底物产生颜色反应，而样本中f-Hb浓度越高，与预包被抗体结合的f-Hb越多，剩余的酶标抗体越少，颜色反应越弱。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中f-Hb的浓度，OD值与f-Hb浓度呈反比关系。 用途： 适用于科研及临床前研究，用于探究f-Hb在疾病进程中的角色，评估疾病严重程度，以及药物对血红蛋白释放的影响等。 反应类型：竞争法 反应时间：约3-4小时 反应性：高度特异，针对小鼠f-Hb 检测方法：比色法 灵敏度：能够准确检测到低于试剂盒提供的最低浓度标准品的f-Hb水平变化 样本体积：50-100μL 样本类型：血清、血浆、组织液或其他相关生物样本 特异性：与其他相关蛋白无显著交叉反应 重复性：板内及板间变异系数均小于10%

二、样品处理与活化方法血清/血浆：直接取用或按一定比例稀释后使用，无需额外活化步骤。 组织液：取适量组织液，如有必要，可加入适量的样本稀释液进行稀释，确保样本中的f-Hb浓度在检测范围内，并去除可能干扰检测的杂质。

三、精密度与回收率

精密度：通过低、中、高浓度样本的批内及批间变异系数评估，均小于10%，确保检测结果的稳定性和可靠性。

回收率：在血清、血浆、组织液等样本中添加已知浓度的f-Hb标准品，回收率范围及平均回收率符合预设标准，且在不同稀释度下表现出良好的线性回收特性。

四、试剂盒组成及保存

48孔配置： 说明书1份 封板膜2片 密封袋1个 酶标包被板1×48 f-Hb标准品（酶标记）0.5ml×6管 酶标抗体试剂3ml×1瓶 样本稀释液5ml×1瓶 显色剂A液5ml×1瓶 显色剂B液5ml×1瓶 终止液2.5ml×1瓶 20×浓缩洗涤液25ml×1瓶 96孔配置： 同上，但各组分数量加倍 保存条件： 按说明书指示保存于2-8℃，避免反复冻融和直接光照，确保试剂的稳定性

五、试剂盒性能灵敏度：能够准确检测到低于最低浓度标准品的f-Hb水平微小变化。 特异性：与其他相关蛋白无显著交叉反应，确保检测结果的准确性。 重复性：变异系数低，保证实验结果的稳定性和可靠性，便于不同批次间的数据比较。

六、注意事项使用前请确保所有试剂恢复至室温并充分混匀，避免温度差异影响检测结果。 严格按照操作步骤进行实验，避免交叉污染，确保实验结果的准确性。 试剂瓶盖需紧密封闭，以防蒸发和污染，影响试剂的稳定性和有效期。 试剂体积以实际发货版说明书为准，分装时可能略有盈余，请按说明使用。

七、操作步骤

准备：将所需试剂和样本恢复至室温，并准备好实验所需的设备和耗材。 标准品加样：在标准品孔中加入不同浓度的f-Hb标准品（酶标记）溶液。 样本加样：在样本孔中加入待测样本溶液。 加酶标抗体：向所有孔中加入适量的酶标抗体试剂。 温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育。 洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤若干次，拍干。 显色：向每孔中加入显色剂A和B，避光显色。 终止：显色结束后，向每孔中加入终止液终止反应。 测定：在450nm波长下测定各孔的OD值。

八、试验所需自备物品

酶标仪（450nm波长滤光片） 高精度移液器及吸头 37℃恒温箱 双蒸水或去离子水 吸水纸 （如需处理组织样本）组织匀浆器

九、结果判断与分析

根据OD值绘制标准曲线，确保曲线的R²值大于0.99，保证标准曲线的准确性。 通过样本的OD值在标准曲线上查找对应的f-Hb浓度，注意OD值与f-Hb浓度呈反比关系。 根据实验需求对数据进行统计分析，如计算均值、标准差、进行t检验或方差分析等，以探究f-Hb在样本中的分布规律和差异。