一、细胞基本属性
细胞名称:人结直肠腺癌细胞(NCI - H498)
细胞别称:H498;结直肠腺癌细胞系
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:成年患者(临床病理信息保密)
组织来源:结直肠腺癌组织
生长特性:贴壁生长(依赖细胞间黏附及基质支撑)
细胞形态:上皮样,单层铺展后呈不规则多边形
细胞代数:P3 - P10(建议使用代数以保证遗传稳定性)
细胞规格:1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含血清型冻存液)
培养基:RPMI - 1640培养基(含10% FBS+1%双抗)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:血清型冻存液(含10% DMSO),液氮长期保存
倍增时间:~24 - 48小时(与培养条件及传代密度相关)
供应限制:仅用于肿瘤机制研究及药物筛选,禁止临床或体内应用
二、细胞培养操作指南
收货处理:
• 冻存管复苏:37℃水浴震荡解冻≤1分钟,离心去冻存液后重悬于预热培养基
• 培养瓶运输:酒精消毒后立即转入CO₂培养箱平衡4小时
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每2 - 3天传代)
传代比例:1:3至1:6(推荐初始接种密度1×10^4 cells/cm²)
消化方法:
• 预冷PBS清洗后加入0.25%胰酶 - EDTA
• 37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项:
• 消化终止时需添加等体积含血清培养基
• 传代后48小时内避免频繁观察以防扰动贴壁
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:基础培养基+20% FBS+10% DMSO
细胞密度:建议冻存浓度5×10^6 cells/mL
冻存步骤:
• 对数生长期细胞经消化离心后重悬于冻存液
• 程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃ 24小时→液氮长期保存
复苏验证:
• 复苏存活率≥85%(台盼蓝染色法)
• 功能验证:CCK - 8检测P5代细胞增殖曲线应符合标准
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流温度记录异常导致细胞失活(需提供运输温度曲线)
2. 到货72小时内经qPCR证实支原体污染
3. STR分型与ATCC数据库一致性<85%
4. 复苏后贴壁率<70%(需提供明场显微图像)
不予重发情形:
1. 使用无血清培养基导致细胞脱落
2. 未按规范进行胰酶浓度梯度测试
3. 培养箱CO₂浓度波动超过±3%
4. 未定期进行核型分析导致遗传漂移
(注:本简介依据NCI - H498标准培养流程编制,实际操作请以最新版说明书为准)