一、细胞基本属性
1. 细胞名称:人神经母细胞瘤细胞(IMR32)
2. 细胞别称:IMR - 32;神经母细胞瘤细胞系
3. 种属来源:人(Homo sapiens)
4. 年龄性别:儿童(原代取自神经母细胞瘤患者)
5. 组织来源:腹部神经母细胞瘤组织
6. 生长特性:贴壁生长(需基质胶包被培养器皿)
7. 细胞形态:不规则多角形或梭形,可形成神经突样结构
8. 细胞代数:P5 - P15(建议实验使用中低代次以保证表型稳定)
9. 细胞规格:1×10⁶ cells/T25培养瓶 或1mL冻存管(含专用冻存液)
10. 培养基:RPMI 1640培养基(含10% FBS+1%非必需氨基酸+1%丙酮酸钠)
11. 培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
12. 冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO+细胞保护剂),液氮长期保存
13. 倍增时间:约30 - 48小时(与培养密度及神经生长因子添加相关)
14. 供应限制:仅限科研用途,不可用于临床或商业用途
二、细胞培养操作指南
1. 收货处理
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶:酒精消毒表面,静置培养箱4小时再换液
2. 传代标准:细胞融合度达80% - 90%(通常每5 - 7天传代)
3. 传代比例:1:3至1:6(推荐接种密度3×10⁴ cells/cm²)
4. 消化方法
- 使用0.25% Trypsin - EDTA(含0.02% EDTA)
- 37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
5. 注意事项
- 消化后需立即加入含血清培养基终止反应
- 传代后48小时内避免频繁观察以防干扰贴壁
三、细胞冻存操作规范
1. 冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+20% FBS)
2. 细胞密度:冻存浓度:5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
3. 冻存步骤
- 消化离心后重悬细胞于冻存液
- 程序降温:4℃ 30min → - 80℃过夜 → 液氮长期保存
4. 复苏验证
- 复苏后24小时存活率≥85%(台盼蓝染色法)
- 功能验证:神经突生长实验(P8代细胞应维持分化潜能)
四、售后服务承诺
1. 重发标准
- 运输过程中液氮罐失压导致细胞失活(需提供温度记录证明)
- 到货72小时内检测出支原体污染(需第三方检测报告)
- STR分型与数据库记录不一致(需提供比对图谱)
2. 不予重发情形
- 使用非推荐培养基导致细胞分化异常
- 未按时传代导致细胞过度老化
- 未进行神经生长因子诱导即进行功能实验
- 擅自进行基因编辑后出现表型改变