一、细胞基本属性
细胞名称:人小细胞肺癌细胞(H69AR)
细胞别称:H69AR细胞;H69多药耐药亚系
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:成年患者(具体性别信息未公开)
组织来源:小细胞肺癌组织(经化疗药物筛选获得耐药株)
生长特性:贴壁生长(需胶原包被培养器皿)
细胞形态:不规则梭形或椭圆形,贴壁后呈散在分布
细胞代数:P5 - P15(建议使用中低代次维持耐药特性)
细胞规格:1×10^6 cells/T75培养瓶或1mL冻存管(含专用冻存液)
培养基:RPMI - 1640(含10% FBS+1%青霉素/链霉素+0.1mM β-巯基乙醇)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO),液氮长期保存
耐药特性:对阿霉素等蒽环类药物具有显著耐药性(需定期验证)
供应限制:仅供肿瘤耐药机制研究,不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
• 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去冻存液后重悬于预热培养基
• 培养瓶:酒精消毒表面后立即转入CO₂培养箱
传代标准:融合度达80% - 90%(建议每周传代2次)
传代比例:1:3至1:4(维持高增殖活性需避免过度稀释)
消化方法:
• 使用0.25% Trypsin - EDTA溶液
• 37℃消化3 - 5分钟,机械轻拍促进脱落
注意事项:
• 培养器皿需预包被0.1mg/mL胶原蛋白
• 定期检测多药耐药基因(MDR1)表达水平
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:90% FBS+10% DMSO
细胞密度:冻存浓度≥5×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
• 消化后细胞悬液离心去上清
• 梯度降温程序:4℃ 30min→ - 80℃过夜→液氮长期存储
复苏验证:
• 复苏存活率≥85%(需在6小时内贴壁)
• 耐药性验证:每3个月进行IC50值测定(阿霉素浓度梯度实验)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 物流温度记录异常导致细胞失活(需提供温度记录曲线)
2. 到货72小时内经PCR证实支原体污染
3. STR分型与数据库记录不符(需提供第三方检测报告)
不予重发情形:
1. 未使用推荐胶原包被导致细胞贴壁失败
2. 擅自更改培养基成分影响耐药表型
3. 未定期传代导致细胞自发分化
4. 超过建议代次(P15)后出现的遗传漂移