一、细胞基本属性
细胞名称:人皮肤黑色素细胞(Human Skin Melanocytes)
细胞别称:HSM;表皮黑色素细胞;皮肤黑素细胞
种属来源:人(Homo sapiens)
年龄性别:健康成人(性别不限,供体筛选无皮肤病变史)
组织来源:表皮基底层组织
生长特性:贴壁生长(依赖特定基质涂层)
细胞形态:典型树突状或多角形,胞质内含黑色素颗粒
细胞代数:P3 - P8(维持功能性黑色素合成能力)
细胞规格:5×10⁵ cells/T25培养瓶 或1mL冻存管(含专用无血清冻存液)
培养基:Melanocyte Growth Medium M - 254(含2%FBS+黑色素细胞特异性生长添加剂)
培养条件:气相:5%CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10%DMSO及细胞保护剂), - 150℃以下长期保存
倍增时间:~72 - 96小时(依赖培养基活性及细胞密度)
供应限制:仅限体外研究使用,不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,加入预热的培养基轻柔混匀
- 培养瓶:75%酒精表面消毒后静置培养箱平衡1小时
传代标准:细胞融合度达80% - 85%(建议每5 - 7天传代一次)
传代比例:1:2至1:3(推荐接种密度3×10³ cells/cm²)
消化方法:
- 使用0.25%胰酶 - EDTA(含钙镁平衡液)
- 37℃消化3 - 5分钟,显微镜下观察细胞边缘卷曲后终止
注意事项:
- 避免紫外线直射(防止黑色素过度活化)
- 传代后48小时内避免更换培养基(维持生长因子稳定性)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10%DMSO+20%血清替代物)
细胞密度:冻存浓度:1×10⁶ - 3×10⁶ cells/mL
冻存步骤:
- 离心收集细胞,轻柔重悬于预冷冻存液
- 程序降温:4℃30分钟→ - 20℃2小时→ - 80℃12小时→液氮长期保存
复苏验证:
- 复苏后48小时检测细胞贴壁率(标准≥85%)
- 功能验证:酪氨酸酶活性检测(P5代细胞应保持正常黑色素合成水平)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输过程中温度记录异常导致细胞失活(需提供物流温度监控证明)
2. 到货7日内经检测证实微生物污染(需提供第三方检测报告)
3. 复苏后存活率低于80%(台盼蓝染色法)
4. 细胞特异性标记物鉴定不符合标准(如S100阴性)
不予重发情形:
1. 未按说明书要求使用紫外线防护措施
2. 自行更改培养基配方导致功能异常
3. 细胞培养超过推荐代数(P8)后出现特性改变
4. 未使用配套基质胶进行贴壁培养