一、细胞基本属性
- 细胞名称：U251 MG/TMZ+LUC(3000)人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞荧光素酶标记
- 细胞别称：U251 - TMZ - R - Luc；替莫唑胺耐药胶质瘤细胞 - LUC标记
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 背景特征：成年患者来源（性别与年龄信息保密），经替莫唑胺梯度诱导筛选建立的耐药亚系
- 组织来源：脑组织星形胶质瘤（WHO IV级）
- 生长特性：贴壁生长（需胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：不规则多形性，部分呈梭形或星形突起
- 细胞代数：P5 - P15（传代稳定性经qPCR验证）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/冻存管（含无血清冻存液）或T25培养瓶（贴壁状态）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1% L - 谷氨酰胺+3000μM替莫唑胺+150μg/mL潮霉素B+荧光素酶底物）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO+海藻糖保护剂），液氮长期保存
- 耐药特性：经3000μM TMZ持续诱导，IC50值较野生型提高15倍以上
- 标记特性：稳定表达荧光素酶基因（Luc2），可通过活体成像或化学发光检测
- 供应限制：仅限肿瘤耐药机制研究，禁止临床或体内外治疗用途
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去冻存液后重悬于预热培养基；培养瓶：酒精擦拭表面后直接置于CO₂培养箱，4小时后更换新鲜培养基
- 传代标准：融合度达80% - 90%（耐药株生长速率较慢，约5 - 7天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：使用0.25%胰酶 - 0.02% EDTA溶液，37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁至细胞脱落
- 注意事项：维持3000μM TMZ浓度以防耐药性丢失；传代后48小时内避免荧光素酶活性检测
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO+10% FBS+1M海藻糖）
- 冻存密度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：离心收集细胞，重悬于预冷冻存液；程序降温：4℃ 30分钟 → - 80℃ 24小时 → 液氮储存
- 复苏验证：复苏存活率≥85%（台盼蓝染色法）；功能验证：化学发光法检测Luc活性（RLU值≥1×10⁶/10⁴ cells）
四、售后服务承诺
- 重发标准：干冰运输失效导致细胞死亡（需提供融化证据）；7日内证实支原体污染（需提供检测报告）；荧光素酶活性低于标准值90%；STR分型与数据库不匹配
- 不予重发情形：未持续添加TMZ导致耐药性丢失；使用非指定底物干扰Luc活性检测；未按规范进行传代导致基因沉默；超过14天未进行支原体检测
