一、细胞基本属性
细胞名称:人恶性非霍奇金淋巴瘤自然杀伤细胞(NK - 92 MI)
细胞别称:NK - 92MI细胞;NK92MI细胞;活化NK细胞系
种属来源:人(Homo sapiens)
疾病背景:源自60岁男性非霍奇金淋巴瘤患者外周血单核细胞
组织来源:外周血单核细胞经IL - 2诱导永生化
生长特性:悬浮聚团生长(依赖IL - 2激活信号)
细胞形态:圆形或椭圆形,直径10 - 15μm,胞质颗粒明显
细胞代数:P5 - P15(建议不超过P20以维持细胞毒性功能)
细胞规格:1×10⁶ cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:α - MEM培养基(含12.5% FBS+10%马血清+100U/mL IL - 2)
培养条件:气相:5% CO₂+95%空气;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),-150℃以下长期保存
倍增时间:约36 - 48小时(IL - 2浓度依赖性)
供应限制:仅限肿瘤免疫研究,不可用于临床治疗或体内移植
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管:37℃水浴快速解冻,离心后重悬于预温培养基
培养瓶:静置培养箱30分钟后轻柔吹散细胞团
传代标准:细胞密度达1×10⁶ cells/mL(通常每2 - 3天传代一次)
传代比例:1:2至1:3(建议终浓度5×10⁵ cells/mL)
操作方法:
离心收集细胞后重悬于新鲜培养基
补充IL - 2至终浓度100U/mL
注意事项:
避免频繁离心(损伤细胞表面活化标记)
维持IL - 2浓度稳定(浓度波动导致功能失活)
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO及蛋白稳定剂)
细胞密度:冻存浓度1×10⁷ cells/mL
冻存步骤:
离心收集细胞后重悬于预冷冻存液
程序降温:4℃ 30min → -80℃ 24h → 液氮长期保存
复苏验证:
复苏后12小时台盼蓝染色存活率≥90%
功能验证:K562细胞杀伤实验(效靶比10:1时杀伤率应>60%)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输温度记录异常导致细胞死亡(需提供温度记录文件)
2. 5天内证实支原体/真菌污染(需提供第三方检测报告)
3. 细胞复苏存活率低于85%(台盼蓝染色法)
4. STR分型与数据库记录不符
不予重发情形:
1. 未按时补充IL - 2导致细胞凋亡
2. 使用非配套培养基导致增殖停滞
3. 未按规定进行辐射灭活直接用于共培养
4. 超过推荐代数仍进行关键实验