一、细胞基本属性
- 细胞名称：MRC - 5人胚肺成纤维细胞（Human Embryonic Lung Fibroblasts）
- 细胞别称：MRC - 5细胞；人胚肺二倍体成纤维细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 年龄性别：14周男性胚胎（供体无遗传性疾病史）
- 组织来源：胚肺组织
- 生长特性：贴壁生长（需依赖细胞贴壁基质）
- 细胞形态：典型成纤维细胞样，长梭形或多极伸展
- 细胞代数：P15 - P25（建议使用低传代以保证遗传稳定性）
- 细胞规格：1×10^5 cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含含血清冻存液）
- 培养基：MEM培养基（含10% FBS + 1%非必需氨基酸 + 1% L -谷氨酰胺）
- 培养条件：气相：5% CO₂ + 95%空气；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：含血清冻存液（含10% DMSO）， - 150℃以下长期保存
- 倍增时间：~36 - 48小时（受培养密度与血清批次影响）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或商业生产
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精擦拭表面后静置于培养箱1小时平衡温湿度
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:2至1:4（推荐接种密度3×10³ cells/cm²）
- 消化方法
- 使用试剂：0.25% Trypsin - EDTA（含Ca²⁺/Mg²⁺缓冲液）
- 操作流程：37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落，立即加入含血清培养基终止
- 注意事项
- 避免消化过度导致细胞膜损伤
- 传代后12小时更换培养基以清除残余酶
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：含血清冻存液（含10% DMSO + 20% FBS）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁵ - 1×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤
- 消化离心后重悬于冻存液，分装至冻存管
- 程序降温：4℃ 30min → - 20℃ 2h → - 80℃过夜 → 液氮长期保存
- 复苏验证
- 复苏后存活率≥90%（台盼蓝染色法）
- 功能验证：细胞增殖曲线检测（P20代内应保持正常分裂能力）
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输过程温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 到货72小时内证实细菌/真菌污染（需提供染色检测图像）
- STR图谱与标准数据库不一致
- 复苏后贴壁率低于80%
- 不予重发情形
- 未按规范进行细胞传代（如高密度传代导致老化）
- 使用非指定培养基或血清批次
- 反复冻融或保存温度高于 - 80℃
- 未进行支原体检测直接扩增使用
