一、细胞基本属性
细胞名称:Mahlavu人肝癌细胞
细胞别称:HCC Mahlavu;人肝癌细胞系
种属来源:人(Homo sapiens)
疾病背景:源自肝癌患者肝脏肿瘤组织,具有典型肝细胞癌特征
组织来源:肝肿瘤组织(病理分级为中分化肝细胞癌)
生长特性:贴壁生长(需胶原蛋白包被培养器皿)
细胞形态:上皮样多角形,核质比高,成簇生长趋势
细胞代数:P5 - P15(推荐使用代数以保证增殖稳定性)
细胞规格:1×10⁶ cells/T25培养瓶或1.5mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:DMEM高糖培养基(含10% FBS+1%双抗+1%非必需氨基酸)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞复苏增强剂),液氮长期保存
倍增时间:约36 - 48小时(依赖传代密度及血清批次)
供应限制:仅限肿瘤学研究,禁止用于临床治疗或药物量产
二、细胞培养操作指南
收货处理:
冻存管:37℃水浴解冻后离心去冻存液,重悬于预温培养基
培养瓶:酒精表面消毒后直接置于CO₂培养箱平衡4小时
传代标准:细胞融合度达80% - 90%(推荐每周传代2次)
传代比例:1:3至1:6(建议初始接种密度1×10⁴ cells/cm²)
消化方法:
使用0.25%胰酶 - EDTA溶液(含0.02%胶原酶)
37℃消化3 - 5分钟,轻拍瓶壁促使细胞脱落
注意事项:
避免消化时间过长导致细胞膜损伤
传代后需24小时内更换培养基以去除死细胞碎片
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:无血清冻存液(含10% DMSO+胎牛血清替代物)
细胞密度:冻存浓度:5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
冻存步骤:
消化离心后缓慢加入预冷冻存液
程序降温:4℃ 30分钟→ - 80℃过夜→液氮长期储存
复苏验证:
复苏后48小时检测细胞存活率(台盼蓝染色≥85%)
功能验证:CCK - 8增殖曲线测定(P10代细胞应维持对数生长期活性)
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 运输温度异常导致细胞失活(需提供物流温度记录)
2. 到货7日内经检测确认支原体污染(需第三方检测报告)
3. 复苏后存活率低于80%(按规范操作前提下)
4. STR分型与数据库记录不符
不予重发情形:
1. 收到细胞后超72小时未进行复苏操作
2. 擅自改用无血清或低血清培养基培养
3. 未按规范进行传代导致细胞老化
4. 实验污染未及时反馈且影响责任判定