一、细胞基本属性
- 细胞名称：LOVO/5FU人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株
- 细胞别称：LOVO/5FU耐药株；氟尿嘧啶耐药性结直肠癌细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 疾病背景：结直肠癌患者原代细胞经氟尿嘧啶（5 - FU）梯度诱导筛选获得
- 组织来源：结直肠癌组织（病理分级为腺癌）
- 生长特性：贴壁生长（需胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：上皮样多边形，耐药株呈现胞体增大及核质比降低特征
- 细胞代数：P3 - P10（推荐使用代数内保证耐药表型稳定性）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含专用冻存液）
- 培养基：RPMI - 1640（含10% FBS+1%双抗+1mM丙酮酸钠）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含7% DMSO及海藻糖保护剂），液氮长期保存
- 耐药特性：对5 - FU的IC50值较亲本细胞提升≥10倍（需定期药物压力维持）
- 供应限制：研究级产品，禁止临床治疗或转基因实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴解冻后离心去除冻存液，重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精擦拭表面后直接置于CO₂培养箱平衡4小时
- 传代标准：融合度达80% - 90%（建议每2 - 3天传代，避免密度过载）
- 传代比例：1:3至1:6（依据实验需求调整接种密度）
- 消化方法：
- 使用0.25%胰酶 - EDTA溶液（含0.02%胶原酶）
- 37℃消化3 - 5分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落
- 耐药维持：
- 每两周补充5 - FU（终浓度10μM）进行表型巩固
- 药物处理24小时后需更换新鲜培养基
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含7% DMSO+3%海藻糖）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化后细胞离心去上清，缓慢滴加预冷冻存液
- 程序降温：4℃ 30min → - 80℃ 24h → 液氮长期储存
- 复苏验证：
- 复苏存活率≥85%（台盼蓝染色法）
- 耐药性检测：每季度通过CCK - 8法验证5 - FU敏感性
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输温度异常导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 72小时内经检测证实支原体污染（需第三方报告）
- 耐药性丢失（IC50值低于亲本细胞5倍）
- STR分型与数据库不匹配
- 不予重发情形：
- 未按规范进行药物压力维持导致表型漂移
- 使用非指定胶原包被培养器皿
- 细胞传代超过P10代数仍继续使用
- 解冻后未进行耐药性验证直接开展关键实验
