一、细胞基本属性
- 细胞名称：HepG2.2.15人肝癌细胞
- 细胞别称：HepG2.2.15；HBV整合型肝癌细胞
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 组织来源：肝癌组织（经乙型肝炎病毒基因组转染）
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原包被培养器皿）
- 细胞形态：上皮样多角形，单层贴壁，细胞间连接紧密
- 细胞代数：P5 - P10（推荐使用代数以保证病毒基因稳定性）
- 细胞规格：1×10^6 cells/T75培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%青霉素 - 链霉素+400μg/mL G418筛选）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂）， - 150℃以下长期保存
- 倍增时间：~48 - 60小时（依赖培养密度及传代处理）
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床治疗或生物医药生产
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，加入5mL预热培养基轻柔混匀
- 培养瓶：75%酒精表面消毒后静置于培养箱1小时平衡
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（通常每3 - 5天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:4（推荐接种密度1×10^4 cells/cm²）
- 消化方法：
- 使用0.25% Trypsin - EDTA（含0.02% EDTA）
- 37℃消化2 - 3分钟，镜下观察细胞间隙扩大后终止
- 注意事项：
- 避免消化过度（影响HBV基因表达稳定性）
- 传代后48小时内更换培养基以维持筛选压力（G418）
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及渗透保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10^6 - 2×10^6 cells/mL
- 冻存步骤：
- 离心收集细胞后轻柔重悬于冻存液
- 梯度降温：4℃ 30分钟→ - 20℃ 2小时→ - 80℃过夜→液氮长期保存
- 复苏验证：
- 复苏后24小时检测存活率（台盼蓝染色法，存活率≥90%）
- 功能验证：HBV DNA分泌检测（P5代细胞应维持病毒复制活性）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度异常导致细胞死亡（需提供物流温度记录证明）
- 5天内证实支原体/细菌污染（需提供第三方检测报告）
- 复苏后细胞存活率低于85%（台盼蓝染色法）
- HBV基因整合位点检测与描述不符
- 不予重发情形：
- 客户未在48小时内完成复苏操作
- 使用非G418筛选培养基导致病毒基因丢失
- 未按规范进行胶原包被导致细胞贴壁失败
- 自行转染或基因编辑引发细胞功能异常
