一、细胞基本属性
- 细胞名称：HCT15/5Fu人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株
- 细胞别称：结直肠癌氟尿嘧啶耐药细胞；HCT15/5Fu耐药株
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 疾病背景：源自结直肠癌患者肿瘤组织，经氟尿嘧啶（5 - Fluorouracil）诱导建立的耐药亚系
- 组织来源：结直肠癌原发灶（经病理确诊为腺癌）
- 生长特性：贴壁生长（依赖胶原蛋白包被培养器皿）
- 细胞形态：上皮样或多边形，耐药株呈现细胞间隙增宽及胞体收缩特征
- 细胞代数：P3 - P8（确保耐药表型稳定性与遗传背景一致性）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：RPMI 1640（含10% FBS+1%双抗+维持性5 - FU浓度）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO及细胞保护剂），液氮长期保存
- 耐药特性：对5 - FU的IC50值显著高于亲本HCT15细胞（需定期检测耐药性）
- 供应限制：仅限肿瘤耐药机制研究，不可用于临床治疗或药物筛选
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于预热培养基。
- 培养瓶：75%酒精擦拭外壁，静置4小时后观察贴壁状态。
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（耐药株增殖速率较慢，建议每5 - 7天传代）
- 传代比例：1:2至1:3（推荐接种密度1×10⁴ cells/cm²）
- 消化方法：使用0.25%胰酶 - EDTA（含5 - FU维持浓度），37℃消化3 - 5分钟，轻柔吹打至细胞脱壁。
- 注意事项：避免频繁传代导致耐药性衰减（建议每3代检测一次IC50），培养液中需维持5 - FU浓度以防止耐药性丢失。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO及耐药表型稳定剂）
- 细胞密度：冻存浓度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤：离心收集细胞，重悬于含5 - FU的冻存液，梯度降温：4℃ 30分钟→ - 80℃ 24小时→转入液氮。
- 复苏验证：复苏后48小时检测存活率（台盼蓝染色≥85%），耐药性验证：CCK - 8法测定5 - FU半数抑制浓度（与批次报告比对偏差≤10%）
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程温度记录异常导致细胞死亡（需提供物流温度监控截图）。
- 7天内证实支原体/真菌污染（需提供荧光PCR检测结果）。
- 细胞耐药性显著偏离质控范围（需提供IC50检测数据）。
- STR分型与数据库不匹配。
- 不予重发情形：
- 未按推荐浓度维持5 - FU导致耐药性丢失。
- 使用非指定培养基或擅自停用5 - FU。
- 未定期检测耐药性导致实验数据偏差。
- 液氮保存不当造成细胞失活。
（注：所有操作需遵守生物安全规范，耐药株实验废弃物按危险医疗废物处理）
