一、细胞基本属性
细胞名称:人胚胎干细胞H1(Human Embryonic Stem Cell Line H1)
细胞别称:WA01;H1 - hESC;H1细胞系
种属来源:人(Homo sapiens)
胚胎来源:健康囊胚期内细胞团(经伦理审查批准)
组织来源:胚胎干细胞系
生长特性:贴壁生长(依赖饲养层或基质胶支持)
细胞形态:克隆状集落生长,边缘清晰,细胞核大、胞质致密
细胞代数:P10 - P20(维持多能性及核型稳定性)
细胞规格:1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管(含无血清冻存液)
培养基:mTeSR1无血清培养基(含基础生长因子及TGF - β信号激活剂)
培养条件:气相:5% CO₂;温度:37℃;湿度:95%
冻存条件:无血清冻存液(含10% DMSO及细胞保护剂),液氮气相长期保存
多能性标志:OCT4+/NANOG+/SSEA - 4+(免疫荧光验证)
供应限制:仅限基础科研用途,禁止生殖工程或嵌合体研究
二、细胞培养操作指南
收货处理:
- 冻存管:37℃水浴快速解冻,离心去除冻存液后重悬于预温培养基
- 培养瓶:转移至含基质胶的预包被培养皿,静置培养箱过夜
传代标准:集落直径达400 - 600μm或融合度达70% - 80%
传代比例:1:6至1:10(机械法或酶解法分散集落)
消化方法:
- 使用1mg/mL Dispase酶解3 - 5分钟,轻柔吹打分离集落边缘
- 或采用0.5mM EDTA溶液室温处理5 - 8分钟
注意事项:
- 避免单细胞传代(诱导自发分化风险)
- 每日更换培养基,维持碱性磷酸酶活性
三、细胞冻存操作规范
冻存液配方:mFreSR无血清冻存液(含10% DMSO及多能性保护剂)
细胞密度:冻存浓度3×10^6 - 5×10^6 cells/mL
冻存步骤:
- 集落消化后离心收集,重悬于冻存液
- 程序降温:4℃ 30min → - 80℃ 24h → 液氮气相长期保存
复苏验证:
- 复苏后48小时检测集落形成效率(≥70%为合格)
- 多能性验证:拟胚体分化实验及三胚层标志物表达检测
四、售后服务承诺
重发标准:
1. 液氮运输中保存罐失压导致细胞失活(需提供温度记录仪数据)
2. 7天内证实支原体污染(需提供PCR检测结果)
3. 复苏后集落形成率低于60%(需提供明场显微图像)
4. 核型分析显示异常(需提供G显带检测报告)
不予重发情形:
1. 使用非饲养层或无基质胶培养导致细胞分化
2. 未定期进行核型检测或STR身份验证
3. 单细胞传代操作引发基因组不稳定性
4. 未按规范进行无菌操作造成交叉污染
(注:所有操作需符合《人胚胎干细胞研究伦理指导原则》,实验记录完整可追溯)