一、细胞基本属性
- 细胞名称：人胚胎干细胞H9（WA09）
- 细胞别称：H9 hESC、WA09细胞系、人胚胎干细胞系H9
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 胚胎来源：健康胚胎（经伦理审查批准，符合国际干细胞研究指南）
- 组织来源：胚胎囊胚期内细胞团
- 生长特性：贴壁生长（无饲养层培养，依赖基质胶或合成涂层）
- 细胞形态：典型集落状生长，细胞核大、胞质少、边界清晰，呈紧密三维克隆结构
- 细胞代数：推荐使用代数：P20 - P35（经多能性标记物验证）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/冻存管（含无血清冻存液）或T25培养瓶（预铺基质胶）
- 培养基：专用无血清培养基（含bFGF、TGF - β等维持多能性必需因子）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含10% DMSO），液氮气相长期保存（-150℃以下）
- 倍增时间：约24 - 36小时（与集落密度及传代效率相关）
- 应用限制：仅供基础研究，禁止临床移植、生殖工程或转基因动物制备
二、细胞培养操作指南
- 收货处理：
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于预铺基质胶的培养器皿。
- 培养瓶：直接置于5% CO₂培养箱平衡，24小时内更换新鲜培养基。
- 传代标准：集落直径达300 - 500μm或边缘细胞开始分化（推荐每5 - 7天传代）
- 传代比例：1:6至1:10（依克隆形态调整，维持适当细胞密度）
- 消化方法：
- 使用0.5 mM EDTA或温和细胞解离试剂。
- 37℃消化2 - 5分钟，轻拍培养皿使集落边缘脱离。
- 注意事项：
- 机械吹打不超过3次以避免单细胞化。
- 传代后6小时内补充ROCK抑制剂提高贴壁率。
- 定期检测OCT4/NANOG表达维持多能性。
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO、30%培养基及细胞保护剂）
- 细胞密度：冻存浓度：1×10⁶ - 2×10⁶ cells/mL
- 冻存步骤：
- 消化收集完整细胞集落，离心后轻柔重悬于冻存液。
- 程序降温：4℃ 30min → -80℃过夜 → 液氮长期保存。
- 复苏验证：
- 存活率≥90%（台盼蓝检测）。
- 多能性验证：免疫荧光检测SSEA - 4/TRA - 1 - 60阳性率≥95%。
- 核型分析：传代至P30需保持正常二倍体核型。
四、售后服务承诺
- 重发标准：
- 运输过程液氮罐失压导致细胞失活（需提供温度记录数据）。
- 到货72小时内经qPCR证实支原体污染。
- 复苏后多能性标记物表达率＜90%。
- STR分型与数据库记录不一致。
- 不予重发情形：
- 未使用推荐基质胶或擅自添加饲养层。
- 连续传代超过P40未做核型检测。
- 解离为单细胞后未及时添加ROCK抑制剂。
- 未按时传代导致自发分化率＞10%
