一、细胞基本属性
- 细胞名称：A375人恶性黑色素瘤细胞（EGFP标记）
- 细胞别称：A375 - EGFP；EGFP标记黑色素瘤细胞；A375荧光稳转株
- 种属来源：人（Homo sapiens）
- 疾病背景：源自女性皮肤恶性黑色素瘤组织，EGFP稳定转染株
- 组织来源：皮肤恶性黑色素瘤原发灶
- 生长特性：贴壁生长（依赖细胞间接触抑制）
- 细胞形态：上皮样或纺锤形，EGFP荧光标记清晰可见
- 细胞代数：P3 - P10（确保荧光稳定性与增殖活性）
- 细胞规格：1×10⁶ cells/T25培养瓶或1mL冻存管（含无血清冻存液）
- 培养基：DMEM高糖培养基（含10% FBS+1%双抗+200μg/mL G418维持筛选）
- 培养条件：气相：5% CO₂；温度：37℃；湿度：95%
- 冻存条件：无血清冻存液（含DMSO及细胞保护剂），-150℃以下长期保存
- 荧光表达：EGFP持续稳定表达，激发波长488nm，发射波长507nm
- 供应限制：仅限科研用途，不可用于临床或体内实验
二、细胞培养操作指南
- 收货处理
- 冻存管：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后重悬于预热培养基
- 培养瓶：酒精擦拭表面后置于CO₂培养箱静置4小时
- 传代标准：细胞融合度达80% - 90%（推荐每2 - 3天传代一次）
- 传代比例：1:3至1:6（依据实验需求调整接种密度）
- 消化方法
- 试剂：使用0.25% Trypsin - EDTA（含酚红指示剂）
- 操作：37℃消化2 - 3分钟，轻拍瓶壁促使细胞脱落，立即加入含血清培养基终止
- 注意事项
- 传代后48小时内避免强光照射以保护荧光强度
- 定期检测G418抗性，防止EGFP标记丢失
三、细胞冻存操作规范
- 冻存液配方：无血清冻存液（含10% DMSO+20% FBS）
- 冻存密度：5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL
- 冻存步骤
- 消化收集细胞，离心后重悬于预冷冻存液
- 分装至冻存管，程序降温：4℃ 30min → - 80℃ 24h → 液氮长期保存
- 复苏验证
- 荧光显微镜观察EGFP表达率（需≥98%）
- 复苏后72小时执行CCK - 8检测验证增殖活性
四、售后服务承诺
- 重发标准
- 运输过程干冰耗尽导致细胞失活（需提供物流温度记录）
- 到货3日内经qPCR证实支原体污染
- EGFP表达率低于95%（需提供荧光成像原始数据）
- STR分型与数据库不匹配
- 不予重发情形
- 未按要求使用G418维持筛选导致标记丢失
- 长时间强光照射引发荧光淬灭
- 未定期检测细胞核型导致遗传漂变
- 使用非指定培养基影响荧光信号强度
