一、产品简介
线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD - IDH)是存在于线粒体中的一种重要酶,在线粒体的代谢过程中发挥着关键作用。它参与三羧酸循环,
对细胞的能量代谢和物质代谢平衡起着至关重要的作用。
定义与功能:
定义:线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD - IDH)是一种能够催化
异柠檬酸氧化脱羧生成α - 酮戊二酸、二氧化碳和还原型
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的酶。
功能:在线粒体的三羧酸循环中,NAD - IDH通过催化异柠檬酸
的氧化脱羧反应,促进能量的产生和代谢中间产物的生成。
NADH在后续的呼吸链中可进一步参与电子传递和氧化磷酸化
过程,为细胞提供能量。同时,该反应产生的α - 酮戊二酸
也是重要的代谢中间产物,参与氨基酸代谢等过程。
催化机制:
NAD - IDH催化异柠檬酸与NAD⁺反应,异柠檬酸被氧化并脱羧,
生成α - 酮戊二酸、二氧化碳和NADH。这一反应是三羧酸循环
中的关键步骤之一,对于维持线粒体的正常代谢功能具有重要意义。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法测定线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD - IDH)的活性。
通过在特定波长下检测反应过程中NADH的生成速率来计算
NAD - IDH的酶活性大小。NADH在该特定波长处有特征吸收峰,
其生成速率与NAD - IDH的酶活性成正比。通过测定反应体系中
NADH的生成量,可以间接计算出NAD - IDH的酶活性。
重要性:
线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD - IDH)作为三羧酸循环中的关键酶,
其活性和存在对于细胞的能量代谢、物质代谢平衡以及维持
线粒体的正常功能具有重要意义。它的正常运作保障了细胞
能够有效地利用营养物质产生能量,维持细胞的正常生长和发育。
二、所需的仪器和用品
进行线粒体异柠檬酸脱氢酶(NAD - IDH)活性测定实验时,
需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量NADH在特定波长处的光吸收值。酶标仪具有
高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下
的吸光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到特定值。
同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。UV板
具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且
样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取线粒体异柠檬酸
脱氢酶(NAD - IDH)。低温条件有助于保持NAD - IDH的活性,
减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),
并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注
离心机有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据
不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,
并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,
要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在NAD - IDH
活性测定实验中,研钵可能用于研磨组织等样品,以便提取其中
的NAD - IDH。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨
过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。
在NAD - IDH活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,
以确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换
以保持其低温效果。