一、产品简介
NAD - 苹果酸脱氢酶(NAD - MDH)广泛存在于线粒体和胞质中,是生物体内参与三羧酸循环及苹果酸 - 天冬氨酸穿梭等重要代谢途径,
的关键酶,在细胞能量代谢和物质代谢中起着至关重要的作用。
定义与功能:
定义:NAD - MDH是一种能够催化苹果酸和NAD⁺之间氧化还原反应,
的酶,具体反应为苹果酸在NAD⁺存在的条件下被氧化为草酰乙酸,
同时NAD⁺被还原为NADH。功能:在细胞的能量代谢中,NAD - MDH,
参与三羧酸循环,将苹果酸转化为草酰乙酸,为细胞呼吸提供能量。
此外,它还参与苹果酸 - 天冬氨酸穿梭过程,在维持细胞内NAD⁺/NADH,
的平衡以及代谢物的跨膜运输方面发挥重要作用。
催化机制:
NAD - MDH催化苹果酸和NAD⁺之间的氧化还原反应,苹果酸作为底物,
在酶的作用下失去两个氢原子,被氧化为草酰乙酸,同时NAD⁺接受这,
两个氢原子,被还原为NADH。这一反应过程依赖于酶的活性中心,
与底物的特异性结合以及辅酶NAD⁺的参与。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行测定。通过在特定波长下检测反应体系,
中NADH的生成速率来计算NAD - MDH的酶活性大小。NADH在该特定,
波长处有特征吸收峰,其生成速率与NAD - MDH的酶活性成正比。
通过测定反应体系中NADH的生成量,可以间接计算出NAD - MDH,
的酶活性。
重要性:
NAD - MDH作为细胞能量代谢和物质代谢过程中的关键酶,其活性,
和存在对于维持细胞的正常生理功能、能量平衡以及适应各种生理,
和病理状态具有重要意义。它在细胞呼吸、代谢调节等方面发挥,
着不可替代的作用,对于研究细胞的代谢机制、疾病的发生发展,
以及药物的作用靶点等具有重要的参考价值。
二、所需的仪器和用品
进行NAD - MDH活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量NADH在特定波长处的光吸收值。酶标仪具有,
高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的,
吸光度值。注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长,
到特定波长。同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量,
结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。UV板,
具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品,
和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取NAD - MDH。低温,
条件有助于保持NAD - MDH的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),
并确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注,
离心机有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据,
不同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,
并且移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,
要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在NAD - MDH,
活性测定实验中,研钵可能用于研磨生物组织等样品,以便提取,
其中的NAD - MDH。注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无,
污染,并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。
在NAD - MDH活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,
以确保实验的准确性。注意事项:在使用冰时,要确保其干净,
无污染,并及时更换以保持其低温效果。