NADP苹果酸酶(NADP-ME)试剂盒

三羧酸循环系列

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规格

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XM-F-SSS00448样分光法486
XM-W-SSS00496样微板法912


一、产品简介

NADP苹果酸酶(NADP - ME)是生物体内参与多种代谢途径的重要酶。它在细胞的能量代谢、物质合成等过程中发挥着关键作用,广泛存在

于生物细胞的细胞质、线粒体等部位。


定义与功能:

定义:NADP苹果酸酶是一种能够催化苹果酸和NADP⁺反应,生成

丙酮酸、二氧化碳和NADPH的酶。

功能:在细胞代谢中,NADP - ME通过催化上述反应,为细胞提供

重要的还原力NADPH。NADPH参与了生物体内众多的合成反应,

如脂肪酸、胆固醇等的合成,同时也在抗氧化防御体系中发挥着重要

作用,保护细胞免受氧化损伤。


催化机制:

NADP - ME催化苹果酸和NADP⁺反应,苹果酸在酶的作用下发生

脱羧反应,生成丙酮酸和二氧化碳,同时将电子传递给NADP⁺,使

其还原为NADPH。这一反应在细胞的代谢网络中具有重要地位,

是连接碳水化合物代谢和还原力生成的关键环节。


活性测定方法:

本试剂盒采用微板法测定NADP苹果酸酶的活性。通过检测反应

体系中NADPH的生成速率来计算酶活性大小。NADPH在特定波

长下有特征吸收峰,其生成速率与NADP - ME的酶活性成正比。

通过测定反应体系中NADPH的生成量,可以间接计算出NADP - ME

的酶活性。


重要性:

NADP苹果酸酶在生物的生长、发育和代谢调节中具有重要意义。

其活性和存在对于细胞维持正常的代谢功能、适应不同的生理环境

以及应对外界刺激具有关键作用。通过不断催化苹果酸反应生成

NADPH,NADP - ME为细胞提供了持续的还原力,保障了细胞内

各种合成反应和抗氧化防御体系的正常运行。


二、所需的仪器和用品

进行NADP苹果酸酶活性测定实验时,需要以下仪器和用品:


酶标仪

用途:用于测量NADPH在特定波长下的光吸收值。酶标仪具有

高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸光

度值。

注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到测定NADPH

所需的特定波长。同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量

结果的准确性。


96孔板(UV板)

用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。UV板具

有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。

注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品

和试剂的加入量要准确。


低温离心机

用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取NADP苹果酸酶。

低温条件有助于保持酶的活性,减少其在处理过程中的损失。

注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),并

确保离心机已预冷至适当温度。在离心过程中,要密切关注离心机

有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。


可调式移液器

用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不

同的实验需求调整移液量,确保实验的准确性和重复性。

注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并且

移液过程中要避免气泡和溅出。在移取不同样品或试剂时,要及时

更换移液器头,以防止交叉污染。


研钵

用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。在NADP苹果酸

酶活性测定实验中,研钵可能用于研磨生物组织等样品,以便提取

其中的酶。

注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨过程

中样品不会受到污染。


用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。在

NADP苹果酸酶活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以

确保实验的准确性。

注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以保持

其低温效果。