一、产品简介
ATP - 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(ATP - PEPCK)是生物体内参与糖异生等代谢途径的关键酶。它在细胞内的能量代谢和物质合成过程中发挥着重要作用,参与了多种代谢途径的调控。
对于维持细胞内的代谢平衡和生物体的正常生理功能至关重要。
定义与功能:
定义:ATP - PEPCK是一种能够催化ATP和磷酸烯醇式丙酮酸反应生成ADP和草酰乙酸的酶。
功能:在糖异生等代谢途径中,ATP - PEPCK通过催化特定反应,促进非糖物质转化为葡萄糖。
维持血糖水平的稳定,保障生物体在不同生理状态下的能量需求。同时,它还参与了细胞内有机酸的代谢和物质转运等过程。
催化机制:
ATP - PEPCK催化ATP和磷酸烯醇式丙酮酸反应,使ATP的高能磷酸键断裂,将磷酸基团转移到磷酸烯醇式丙酮酸上。
生成ADP和草酰乙酸。这一反应在细胞内的能量代谢和物质合成途径中起着关键的连接作用。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行ATP - PEPCK的酶活性测定。通过检测反应体系中特定产物的生成速率或底物的消耗速率。
间接反映ATP - PEPCK的酶活性大小。微板法具有高通量、灵敏度高的特点,能够准确快速地测定样品中酶的活性。
重要性:
ATP - PEPCK作为糖异生等代谢途径中的关键酶,其活性和存在对于生物体维持血糖平衡、适应不同营养状态。
以及调节细胞内代谢网络具有重要意义。通过催化特定的反应,ATP - PEPCK为生物体提供了必要的能量和代谢中间产物。
保障了生物体的正常生长、发育和生理功能。
二、所需的仪器和用品
进行ATP - PEPCK活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量反应体系中特定产物或底物在特定波长下的光吸收值。
酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品在特定波长下的吸光度值。
从而计算出酶的活性。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到合适的检测波长。
同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。
UV板具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取ATP - PEPCK。
低温条件有助于保持ATP - PEPCK的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),并确保离心机已预冷至适当温度。
在离心过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况,若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量。
确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,并且移液过程中要避免气泡和溅出。
在移取不同样品或试剂时,要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。
在ATP - PEPCK活性测定实验中,研钵可能用于研磨组织等样品,以便提取其中的ATP - PEPCK。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。
在ATP - PEPCK活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,以确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,并及时更换以保持其低温效果。