一、产品简介
多酚氧化酶(PPO)是一种广泛存在于植物、动物和微生物中的氧化还原酶。
它在植物的生长发育、防御反应以及果实的褐变过程中起着重要作用。
定义与功能:
定义:PPO是一类能够催化酚类化合物氧化为醌类化合物的酶。
功能:在植物体内,PPO参与了多种生理过程,如对病原菌的防御反应,
当植物受到损伤或感染时,PPO被激活,催化酚类物质氧化,
产生具有抗菌活性的醌类物质,抵御病原菌的入侵。
同时,PPO还与果实的褐变有关,果实受伤或衰老时,
PPO催化酚类底物氧化,导致果实颜色变褐,影响果实的品质和货架期。
催化机制:
PPO催化酚类化合物氧化为醌类化合物,这一反应通常需要氧气的参与。
酚类底物在PPO的作用下,失去电子和质子,被氧化为醌类,
而氧气则被还原为水。
活性测定方法:
本试剂盒采用微板法进行PPO活性测定。该方法通过检测反应体系
中醌类物质的生成量来计算PPO的酶活性大小。
醌类物质在特定波长下有特征吸收峰,其生成速率与PPO的酶活性成正比。
通过测定反应体系在相应波长下吸光度的变化,可以间接计算出PPO的酶活性。
重要性:
PPO在植物的生理和病理过程中具有重要作用。对其活性的准确测定
有助于深入了解植物的防御机制、果实褐变的发生机制,
以及在农业生产中通过调控PPO活性来提高植物的抗病性和果实的品质,
延长果实的货架期等。
二、所需的仪器和用品
进行PPO活性测定实验时,需要以下仪器和用品:
酶标仪
用途:用于测量反应体系在特定波长下的光吸收值。
酶标仪具有高精度和高灵敏度的特点,能够准确测定样品
在特定波长下的吸光度值。
注意事项:在使用前需要预热酶标仪,并调节波长到合适数值。
同时,要保持孔板洁净无异物遮盖,以确保测量结果的准确性。
96孔板(UV板)
用途:用于盛放待测样品溶液和试剂,便于高通量测定。
UV板具有透明度高、光吸收性能好的特点,适合用于紫外光区的测定。
注意事项:在使用前需要确保每个小孔都干净无污染,
并且样品和试剂的加入量要准确。
低温离心机
用途:用于分离样品中的固体和液体成分,提取PPO。
低温条件有助于保持PPO的活性,减少其在处理过程中的损失。
注意事项:在使用前需要设置好离心参数(如转速、时间等),
并确保离心机已预冷至适当温度。
在离心过程中,要密切关注离心机有无异常声音等状况,
若出现异常状况应立即停止离心。
可调式移液器
用途:用于精确移取样品溶液和试剂。
可调式移液器能够根据不同的实验需求调整移液量,
确保实验的准确性和重复性。
注意事项:在使用可调式移液器时,需要确保其已进行校准,
并且移液过程中要避免气泡和溅出。
在移取不同样品或试剂时,要及时更换移液器头,以防止交叉污染。
研钵
用途:用于研磨样品,使其达到实验所需的粒度。
在PPO活性测定实验中,研钵可能用于研磨植物组织等样品,
以便提取其中的PPO。
注意事项:在使用研钵时,要保持其干净无污染,
并确保研磨过程中样品不会受到污染。
冰
用途:用于保持样品在低温条件下,防止其发生降解或变性。
在PPO活性测定实验中,冰可能用于冷却样品或试剂,
以确保实验的准确性。
注意事项:在使用冰时,要确保其干净无污染,
并及时更换以保持其低温效果。