一、产品概述
TRIzol是一种广泛应用于分子生物学领域的试剂,主要用于从各种生物样本(如动物组织、植物组织、细胞等)中同时提取RNA、DNA 和蛋白质。
它基于异硫氰酸胍 - 酚法,能够有效地裂解细胞并使核酸与蛋白质分离,从而便于后续的核酸和蛋白质分析研究工作。其溶液中的主要成分异硫氰
酸胍可以迅速破坏细胞结构,使核酸释放出来,同时抑制RNA酶的活性,保证RNA的完整性。
二、核心优势
1. 高效性:能够快速、高效地从样本中提取高质量的RNA、DNA和蛋白质。一次提取操作即可同时得到三种生物分子,大大节省了实验时间和样本用量。
2. 稳定性:试剂配方经过优化,具有良好的稳定性,能够在一定时间内保持其性能,减少因试剂变质带来的实验误差。
3. 适用性广:可用于多种不同类型的生物样本,包括动物组织、植物组织、微生物以及培养细胞等,具有很强的通用性。
4. 纯度高:提取得到的RNA、DNA和蛋白质纯度较高,能够满足后续各种分子生物学实验的要求,如逆转录 - 聚合酶链反应(RT - PCR)、基因克隆、蛋白质印迹等。
四、使用方法
1. 样本准备:将生物样本(如组织、细胞等)收集到合适的离心管中。对于组织样本,需迅速将其剪碎后加入适量的TRIzol试剂;对于细胞样本,可直接向培养板或离
心管中加入TRIzol试剂。通常每50 - 100mg组织或5×10⁶个细胞加入1ml TRIzol试剂。
2. 细胞裂解:使用移液器反复吹打或使用匀浆器进行匀浆处理,确保样本充分裂解,直至溶液变得澄清无明显颗粒。
3. 分层:将裂解液室温放置5分钟,然后加入氯仿(每1ml TRIzol试剂加入0.2ml氯仿),盖紧离心管盖,剧烈振荡15秒,室温放置2 - 3分钟。之后在4℃下以12000g离心
15分钟,此时溶液会分为三层:下层为红色的有机相(含蛋白质),中间层为白色的界面(含DNA),上层为无色的水相(含RNA)。
4. RNA提取:小心吸取上层水相转移至新的离心管中,加入等体积的异丙醇,轻轻混匀,室温放置10分钟。然后在4℃下以12000g离心10分钟,弃去上清液,此时管底
可见白色的RNA沉淀。用75%乙醇洗涤RNA沉淀,4℃下以7500g离心5分钟,弃去乙醇,干燥沉淀后用适量的无RNase水溶解RNA。
5. DNA提取:将中间层和下层转移至新的离心管中,加入0.3ml无水乙醇,轻轻混匀,室温放置3分钟。4℃下以2000g离心5分钟,弃去上清液。加入1ml 0.1M柠檬酸钠
(含10%乙醇)洗涤DNA沉淀,4℃下以2000g离心5分钟,重复洗涤一次。最后用75%乙醇洗涤沉淀,干燥后用适量的8mM NaOH溶解DNA。
6. 蛋白质提取:将下层有机相转移至新的离心管中,加入1.5ml异丙醇,室温放置10分钟。4℃下以12000g离心10分钟,弃去上清液。用含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋
白质沉淀,室温放置20分钟,4℃下以7500g离心5分钟,重复洗涤两次。最后用无水乙醇洗涤沉淀,干燥后用适量的1% SDS溶解蛋白质。
五、注意事项
1. 操作环境:TRIzol试剂具有一定的腐蚀性和刺激性,操作时应在通风橱中进行,佩戴好实验室常用的防护装备,如手套、护目镜等。
2. 防止RNase污染:在提取RNA的过程中,要特别注意防止RNase的污染,因为RNase可以降解RNA。所有使用的玻璃器皿需经过高温烘烤(180℃,8小时以上),塑料器
皿应使用无RNase的一次性耗材,实验人员应佩戴口罩和手套,并经常更换。
3. 试剂保存:TRIzol试剂应保存在2 - 8℃的环境中,避免阳光直射。使用前需将试剂恢复至室温,以确保其性能稳定。
4. 废弃物处理:使用后的TRIzol试剂及相关废弃物应按照实验室的规定进行处理,避免对环境造成污染。
5. 实验安全:操作过程中如不慎将TRIzol试剂接触到皮肤或眼睛,应立即用大量清水冲洗,并及时就医。
具体说明以说明书为准