RIPA裂解液(强)

常规WesternBlot

货号

规格

细胞系

目录价

M-W3011100MLWB产品系
174


 一、 产品概述

RIPA裂解液(强)是一种常用于生物化学和分子生物学实验的试剂,主要用于从组织或细胞中提取蛋白质。它能有效裂解细胞膜和核膜,使细胞内的蛋白质释放到溶液中,为后续的蛋白质分析,

如Western Blot、免疫沉淀等实验提供高质量的蛋白质样品。该裂解液具有较强的裂解能力,能够溶解大多数类型的蛋白质,包括一些与膜结合紧密的蛋白质。


 二、 核心优势

1. 强大的裂解能力:可以高效率地裂解各种组织和细胞,确保目标蛋白质的充分释放,大大提高了蛋白质的提取效率。

2. 成分稳定:配方经过精心优化,各成分比例精准,能够保证每次实验结果的稳定性和重复性。

3. 兼容性好:与多种下游蛋白质分析技术兼容,如SDS - PAGE、免疫印迹、蛋白质定量测定等,为实验提供了更广泛的应用空间。

4. 操作简便:使用过程简单快捷,无需复杂的操作步骤,节省实验时间和人力成本。


 四、使用方法

 细胞样品

1. 收集细胞:采用合适的方法收集对数生长期的细胞,如胰酶消化法或刮取法,将细胞转移至离心管中。

2. 洗涤细胞:用预冷的PBS洗涤细胞2 - 3次,以去除培养基和其他杂质。每次洗涤后,在4℃下以1000 - 2000g离心3 - 5分钟,弃去上清液。

3. 裂解细胞:根据细胞数量加入适量的RIPA裂解液(强),通常每1×10⁶个细胞加入100 - 200μL裂解液。用移液器轻轻吹打细胞,使细胞与裂解液充分接触,然后将离心管置于冰上

孵育15 - 30分钟,期间可间断振荡以促进裂解。

4. 离心:将裂解后的样品在4℃下以12000 - 14000g离心15 - 20分钟,取上清液至新的离心管中,即为提取的蛋白质样品。


 组织样品

1. 组织预处理:取适量的新鲜组织,用预冷的PBS冲洗干净,去除多余的血液和杂质。将组织剪成小块,放入匀浆器中。

2. 裂解组织:根据组织的重量加入适量的RIPA裂解液(强),一般每100mg组织加入1mL裂解液。在冰上进行匀浆处理,直至组织完全破碎。

3. 后续步骤:将匀浆液转移至离心管中,在冰上孵育15 - 30分钟,期间间断振荡。之后在4℃下以12000 - 14000g离心15 - 20分钟,取上清液作为蛋白质样品。


 五、 注意事项

1. 裂解液保存:RIPA裂解液(强)应在4℃下保存,避免反复冻融,否则可能会影响裂解液的性能。如果需要长期保存,可以将其分装后在 - 20℃下保存。

2. 操作温度:整个操作过程最好在冰上进行,以防止蛋白质的降解。特别是在裂解和离心步骤中,要确保温度维持在低温状态。

3. 蛋白酶抑制剂:为了防止蛋白质被降解,建议在使用前加入适量的蛋白酶抑制剂。可以根据实验需求选择合适的蛋白酶抑制剂混合物。

4. 安全防护:RIPA裂解液含有一些化学物质,如去污剂等,具有一定的刺激性。在操作过程中,应佩戴手套、口罩和护目镜等防护用品,避免接触皮肤和眼睛。如果不慎接触,

应立即用大量清水冲洗,并及时就医。

5. 实验验证:在进行正式实验前,建议先进行预实验,以确定最佳的裂解条件和蛋白质提取效果。同时,应对提取的蛋白质进行质量检测,如蛋白质定量和电泳分析等。


具体说明以说明书为准