大鼠白介素18(IL-18)ELISA

一、产品名称：大鼠白介素18(IL-18)ELISA 

规格：48T/96T

检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），专门设计用于体外定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆或其他相关生物样本中的IL-18水平。

实验过程中，酶标板预包被有特异性抗IL-18抗体，与样本中的IL-18结合形成抗原-抗体复合物。经过洗涤去除未结合成分后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，与抗原

-抗体复合物结合。加入显色底物，在辣根过氧化物酶的作用下发生颜色反应，颜色深浅与IL-18的浓度成正比。使用酶标仪在特定波长下测定吸光度（OD值），通过标准

曲线计算样本中IL-18的浓度。

反应类型：夹心法

反应时间：约约4 - 5小时

反应性：高度特异，针对大鼠IL-18

检测方法：比色法

灵敏度：能够检测到低于试剂盒提供的最低浓度标准品的IL-18

样本体积：50μL-100μL

样本类型：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆或其他相关生物样本

特异性：与其他相关蛋白无明显交叉反应

重复性：板内及板间变异系数均小于10% 

二、样品处理

血清和血浆样本处理：

采集血液后，尽快将血液置于无菌试管中，并按照标准程序进行离心以分离血清或血浆。

离心后，小心收集上清液（血清或血浆），避免吸入任何细胞成分或沉淀。

将收集到的血清或血浆样本分装至干净的离心管中，并标记清楚样本来源、采集日期和具体时间。

若需长期保存，应将样本置于-80℃或更低温度下冷冻保存，并避免反复冻融。

细胞培养上清液处理：

收集处于对数生长期的细胞培养上清液，确保细胞未受到异常刺激或污染。

轻轻摇晃培养瓶或培养板，以充分混匀培养上清液。

使用无菌吸管或移液器小心吸取上清液，避免吸入任何细胞或碎片。

将收集到的上清液分装至干净的离心管中，并标记清楚细胞类型、培养条件和采集日期。

若需长期保存，应将样本置于-80℃或更低温度下冷冻保存。

组织匀浆处理：

取适量新鲜或冷冻的组织样本，使用无菌手术器械将组织切割成小块，并去除任何明显的脂肪、血液或坏死部分。

将组织块置于匀浆器中，加入适量生理盐水或特定的组织匀浆缓冲液（根据试剂盒说明书推荐）进行匀浆，保持冰浴以避免蛋白酶降解。

匀浆完成后，将匀浆液离心以去除不溶性物质和细胞碎片。

收集上清液，并分装至干净的离心管中，标记清楚组织类型、来源和处理条件。

若需长期保存，应将样本置于-80℃或更低温度下冷冻保存。

三、精密度与回收率

精密度：通过低、中、高浓度样本的批内及批间变异系数评估，均小于10%，确保结果的稳定性和可靠性。

回收率：在血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等样本中添加已知浓度的THBS2标准品，回收率范围及平均回收率如下表所示（实际表格数据未列出，因不添加具体数据），且

在不同稀释度下表现出良好的线性回收特性。（具体数值需参照实际测试结果）

四、试剂盒组成及保存

48孔配置：说明书1份、封板膜2片、密封袋1个、酶标包被板1×48、标准品0.3ml×6管、酶标试剂5ml×1瓶、样品稀释液6ml×1瓶、显色剂A液6ml×1瓶、显色剂B液6ml×1瓶、

终止液3ml×1瓶、20×浓缩洗涤液30ml×1瓶。

96孔配置：同上，但各组分数量加倍。

保存条件：按说明书指示保存于2-8℃，避免反复冻融和直接光照。

五、注意事项

使用前请确保所有试剂恢复至室温并充分混匀。

严格按照操作步骤进行实验，避免交叉污染。

试剂瓶盖需紧密封闭，以防蒸发和污染。

试剂体积以实际发货版说明书为准，分装时可能略有盈余。

六、操作步骤

：将所需试剂和样本恢复至室温，并准备好实验所需的设备和耗材。

标准品加样：在标准品孔中加入不同浓度的标准品溶液。

样本加样：在样本孔中加入待测样本溶液。

加酶：向所有孔中加入适量的酶标试剂。

温育：用封板膜封住酶标板，置于37℃恒温箱中温育。

洗涤：轻轻揭去封板膜，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤5次，拍干。

显色：向每孔中加入显色剂A和B，避光显色。

终止：显色结束后，向每孔中加入终止液终止反应。

测定：在450nm波长下测定各孔的OD值。

七、试验所需自备物品

酶标仪（450nm波长滤光片）

高精度移液器及吸头

37℃恒温箱

双蒸水或去离子水

吸水纸

离心机（用于处理细胞培养上清和组织匀浆）

八、结果判断与分析

根据OD值绘制标准曲线，确保曲线的R²值大于0.99。

通过样本的OD值在标准曲线上查找对应的IL-18浓度。

根据实验需求对数据进行统计分析，如计算均值、标准差、t检验或方差分析等。